Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-Fosfo-POLR2A CTD-S5 para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P24928

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da POLR2A (RPB1)

• POLR2A codifica a subunidade RPB1 da RNA polimerase II dirigida por DNA, a maior subunidade catalítica da Pol II, também conhecida como RPB1, hRPB220 e POLR2 (UniProt P24928).
• Como componente catalítico central da Pol II, a RPB1 sintetiza precursores de mRNA e RNAs não codificantes durante o ciclo de transcrição de iniciação, elongação e terminação. Referências relacionadas: PMID:23748380 PMID:27193682 PMID:30190596 PMID:28108474
• O domínio C-terminal (CTD) consiste em 52 repetições de heptapéptidos e sofre fosforilação dinâmica: a fosforilação da Ser5 promove o escape do promotor, enquanto a fosforilação da Ser2 permite a liberação da pausa e a elongação. Referências relacionadas: PMID:24207025 PMID:26124092
• A RPB1 localiza-se predominantemente no núcleo, com presença adicional no citoplasma e nos cromossomos durante a transcrição.
• As modificações pós-traducionais do CTD incluem acetilação, metilação e ubiquitinação, que modulam a iniciação e elongação da transcrição, especialmente de genes induzidos por fatores de crescimento.
• A RPB1 também possui atividade de RNA polimerase dependente de RNA, implicada na extensão de RNA não codificante e em interações hospedeiro-vírus, como a replicação do vírus da hepatite delta.
• Mutações na POLR2A estão ligadas a distúrbios do neurodesenvolvimento e deficiência intelectual (palavra-chave UniProt: Deficiência intelectual, Variante de doença).

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo fosfo-sintético correspondente aos resíduos ao redor da Ser5 do CTD da POLR2A, garantindo especificidade para a forma fosforilada. Valide a especificidade do anticorpo usando tratamento com fosfatase ou bloqueio com peptídeo não fosforilado em seu sistema de ensaio.
• Para Western blot, espere uma banda em ~217 kDa; considere usar uma porcentagem de gel apropriada e condições de transferência para proteínas de alto peso molecular.
• O anticorpo é validado para IHC-P e IF/ICC; otimize as condições de recuperação antigênica e permeabilização com base no tipo de tecido ou célula.
• A reatividade cruzada com camundongo e rato sugere sequências conservadas nessas espécies; confirme a adequação em seu modelo experimental.

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