Anticorpo Policlonal de Coelho Fosfo-POLR2A CTD-T4 para WB, IP, ELISA, ChIP - P24928

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do POLR2A

• POLR2A codifica a maior subunidade da RNA polimerase II (Pol II), uma proteína de ~217 kDa que serve como núcleo catalítico para a síntese de RNA dependente de DNA, essencial para a produção de mRNA e RNA não codificante. Referências relacionadas: PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:30190596
• O domínio C-terminal (CTD) do POLR2A consiste em 52 repetições em tandem do heptapéptido (YSPTSPS) que sofrem fosforilação dinâmica, principalmente em Ser2 e Ser5, para regular a iniciação, elongação e terminação da transcrição, bem como o processamento co-transcricional do RNA. Referências relacionadas: PMID:24207025, PMID:26124092
• POLR2A contém um motivo DxDGD que coordena íons Mg2+ essenciais para a adição de nucleotídeos, e também possui uma atividade exonucleásica 3'-5' para prova de leitura, garantindo alta fidelidade transcricional. Referências relacionadas: PMID:8381534, PMID:9852112
• Localizado principalmente no núcleo e nos cromossomos, o POLR2A também foi detectado no citoplasma, refletindo seu transporte dinâmico e funções multifacetadas.
• Modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação de serina/treonina, acetilação, metilação e ubiquitinação de lisina, modulam a atividade e estabilidade da Pol II.
• O splicing alternativo gera múltiplas isoformas, e mutações no POLR2A estão associadas a distúrbios do neurodesenvolvimento, destacando sua significância clínica.
• Também funciona como uma RNA polimerase dependente de RNA, estendendo RNAs não codificantes, e atua como uma replicase para o vírus da Hepatite delta durante a infecção.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Como o imunógeno é um peptídeo fosfo-específico correspondente ao T4 das repetições CTD do POLR2A, valide a especificidade do anticorpo usando competição com peptídeo não fosforilado ou lisados celulares tratados com fosfatase para confirmar a dependência da fosforilação.
• Para Western blotting (WB), devido ao grande tamanho da proteína (~217 kDa), considere usar géis de SDS-PAGE de baixa porcentagem (ex.: 6-8%) e tempos de transferência estendidos para garantir uma transferência eficiente do POLR2A de comprimento total.
• A aplicação de ChIP pode exigir otimização das condições de reticulação e cisalhamento da cromatina; teste diferentes métodos de cisalhamento (ex.: sonicação ou digestão enzimática) para obter fragmentos de cromatina de 200–500 pb.
• Em experimentos de imunoprecipitação (IP) e ELISA, inclua controles positivos e negativos apropriados, como lisados de linhagens celulares conhecidas por expressar POLR2A (ex.: HeLa, HEK293) e mutantes com defeito de fosforilação, se disponíveis.

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