Anticorpo Monoclonal de Coelho Phospho-RB-S795 para WB, IHC-P, ELISA - P06400

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Proteína Associada ao Retinoblastoma

• A proteína associada ao retinoblastoma (RB1, também conhecida como pRb, p105-Rb, p110-RB1, pp110) é uma proteína supressora de tumor codificada pelo gene RB1 em humanos.
• RB1 é um regulador chave da transição G1/S do ciclo celular. Em seu estado hipofosforilado, ela se liga e inibe fatores de transcrição E2F, reprimindo a transcrição de genes necessários para a entrada na fase S. Referências relacionadas: PMID:10499802
• A fosforilação de RB1 mediada por cinase dependente de ciclina (CDK) interrompe sua interação com E2Fs, liberando a repressão transcricional e permitindo a progressão do ciclo celular. Referências relacionadas: PMID:10499802
• RB1 também promove a transição G0-G1 através da fosforilação por CDK3/ciclina-C, destacando ainda mais seu papel regulador na entrada e saída do ciclo celular. Referências relacionadas: PMID:15084261
• Subcelularmente, RB1 é predominantemente nuclear, mas também pode ser encontrada no citoplasma, consistente com suas funções na regulação da transcrição e e organização da cromatina.
• RB1 está envolvida na formação de heterocromatina e silenciamento epigenético através do recrutamento de metiltransferases de histonas (por exemplo, SUV39H1, KMT5B, KMT5C) e desacetilases de histonas, mantendo assim a estrutura da cromatina.
• A expressão tecidual inclui a retina e queratinócitos de prepúcio, onde a proteína RB1 foi detectada.
• Além disso, RB1 é alvo de oncoproteínas virais como o antígeno T grande do SV40, HPV E7 e adenovírus E1A, que interrompem os complexos RB1-E2F para promover a replicação viral.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um fosfopeptídeo sintético correspondente aos resíduos ao redor da Ser795 de RB humano. Ao avaliar a especificidade, considere comparar os sinais com os de um anticorpo RB não específico para fosfo ou amostras tratadas com fosfatase.
• Para Western blotting, RB1 é uma proteína grande (aproximadamente 106 kDa); certifique-se de condições adequadas de transferência e use marcadores pré-corados para confirmar o peso molecular.
• Em imuno-histoquímica (IHC-P), a recuperação de antígeno e as etapas de bloqueio podem influenciar a coloração; otimize esses parâmetros em seu sistema de tecido específico.
• O anticorpo mostra reatividade cruzada com RB1 de camundongo e rato, permitindo seu uso em estudos envolvendo linhagens celulares ou tecidos de roedores; ainda assim, valide os níveis de expressão e o estado de fosforilação em seu modelo.
• Dada sua aplicação em ELISA, certifique-se de que o epítopo fosforilado seja preservado no tampão de revestimento e que os agentes de bloqueio não interfiram na ligação específica ao fosfo.

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