Anticorpo Policlonal de Coelho Fosfo-RB-S811 para WB, ELISA - P06400

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da RB

• A RB é uma proteína supressora de tumor que regula criticamente a transição G1/S do ciclo celular controlando a transcrição dependente de E2F. Referências relacionadas: PMID:10499802
• Em sua forma hipofosforilada, a RB se liga aos fatores de transcrição E2F, bloqueando fisicamente seu domínio de transativação e recrutando enzimas modificadoras de cromatina para reprimir a transcrição gênica. Referências relacionadas: PMID:10499802
• A fosforilação da RB mediada por ciclina/CDK induz sua dissociação dos E2Fs, permitindo a transcrição de genes da fase S e a progressão do ciclo celular; a fosforilação por CDK3/ciclina-C promove especificamente a transição G0-G1. Referências relacionadas: PMID:10499802 PMID:15084261
• A RB também contribui para a formação da heterocromatina estabilizando a metilação de histonas e recrutando metiltransferases de histonas como a SUV39H1, mantendo assim a estrutura constitutiva da heterocromatina.
• Subcelularmente, a RB se localiza principalmente no núcleo, mas também pode ser detectada no citoplasma.
• Modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação, acetilação e metilação, regulam a atividade da RB; oncoproteínas virais (por exemplo, antígeno T grande do SV40, E7 do HPV) podem perturbar os complexos RB-E2F, destacando seu papel nas interações hospedeiro-vírus.
• A expressão tecidual inclui a retina e queratinócitos do prepúcio (ao nível de proteína). Referências relacionadas: PMID:20940255

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Para análise de Western blot, inclua inibidores de fosfatase nos tampões de lise para preservar a fosforilação da RB em Ser811.
• Valide a especificidade do anticorpo por ensaio de competição com peptídeo usando o peptídeo imunógeno fosforilado ou por tratamento com fosfatase de lisados celulares.
• Selecione linhagens celulares ou amostras de tecido com fosforilação conhecida da RB em Ser811 (por exemplo, linhagens de células cancerígenas em ciclo) como controles positivos.
• Para aplicações de ELISA, faça titulação do anticorpo para determinar as condições ideais de revestimento e detecção, realizando ensaios de curva padrão com peptídeo fosfo e controles não fosfo para confirmar a especificidade.

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