Phospho-RPA2-S4/S8 Coelho pAb - P15927

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Subunidade de 32 kDa da Proteína de Replicação A

• A subunidade de 32 kDa da proteína de replicação A (RPA2, também conhecida como RPA32, RP-A p32, RP-A p34) é um componente do complexo heterotrimérico da proteína de replicação A (RPA), que inclui RPA1, RPA2 e RPA3.
• A RPA liga e estabiliza intermediários de DNA de fita simples (ssDNA) gerados durante a replicação do DNA e estresse do DNA, prevenindo o reanelamento e facilitando o recrutamento de proteínas do metabolismo do DNA.
• Na resposta celular a danos no DNA, a RPA é crucial para o reparo do DNA e a ativação do ponto de verificação. Ela recruta o complexo da quinase ATR-ATRIP para os locais de dano no DNA, iniciando a cascata de resposta a danos no DNA.
• A RPA recruta fatores de reparo-chave para a cromatina, incluindo RAD51 e RAD52 para reparo de quebra de fita dupla, bem como XPA e XPG para reparo por excisão de nucleotídeos (NER). Ela também participa do reparo por excisão de base (BER) via interação com UNG.
• A RPA estimula a atividade de helicase 5'-3' da BRIP1/FANCJ, que está envolvida no reparo de ligações cruzadas intercadeias.
  Referências relacionadas:
  PMID:17596542
• A RPA localiza-se principalmente no núcleo e é encontrada em corpos de PML, consistente com seus papéis no metabolismo do DNA.
• A RPA2 é uma fosfoproteína sujeita a várias modificações pós-traducionais, incluindo acetilação, ubiquitinação e splicing alternativo, que regulam sua função na sinalização de danos no DNA.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunogênio é um peptídeo fosforilado sintético em torno de S4 e S8 da RPA2 humana. Para confirmação por Western blot, considere usar lisados celulares tratados com fosfatase para verificar a perda do sinal fosfo-específico.
• O peso molecular previsto da RPA2 não modificada é de 29 kDa; no entanto, a fosforilação ou outras modificações podem afetar a migração. Use marcadores de peso molecular apropriados e valide em seu sistema de amostra.
• Este anticorpo é recomendado para WB e ELISA. Para ELISA, faça titulação do anticorpo para determinar a diluição de trabalho ideal e inclua um controle de peptídeo não fosforilado para garantir a especificidade.
• Reatividade cruzada com RPA2 de rato foi relatada; se usar amostras de rato, valide o desempenho sob suas condições experimentais.

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