mAb de coelho Phospho-Rpb1 CTD-S2/S5 - P24928

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Subunidade RPB1 da RNA polimerase II dirigida por DNA

• A subunidade RPB1 da RNA polimerase II dirigida por DNA (também conhecida como POLR2A) é o componente central catalítico e maior da RNA polimerase II, responsável pela síntese de precursores de mRNA e muitos RNAs não codificantes funcionais. Referências relacionadas: PMID:23748380 PMID:27193682 PMID:30190596
• O ciclo de transcrição da Pol II inclui iniciação, alongamento e terminação. Durante a iniciação, o complexo pré-iniciação se monta nos promotores; o alongamento envolve a síntese processiva de RNA; a terminação libera o transcrito. Referências relacionadas: PMID:23748380 PMID:27193682 PMID:28108474
• A enzima catalisa a adição de nucleotídeos por meio de um mecanismo de dois íons metálicos, com a POLR2A contribuindo com um motivo DxDGD coordenador de Mg²⁺ e a POLR2B fornecendo coordenação adicional. Referências relacionadas: PMID:30190596 PMID:8381534 PMID:9852112
• Possui atividade de exonuclease de provareading 3'→5', permitindo a remoção de nucleotídeos incorretos. Referências relacionadas: PMID:8381534
• O domínio C-terminal (CTD) exclusivo consiste em 52 repetições de heptapeptídeos (YSPTSPS) e sofre fosforilação dinâmica, principalmente em Ser2 e Ser5, que regula a saída do promotor, o alongamento e o processamento de mRNA. Referências relacionadas: PMID:24207025 PMID:26124092
• A acetilação e metilação de lisinas no CTD equilibram a expressão gênica, com a acetilação promovendo a transcrição de genes induzidos por fatores de crescimento e a metilação geralmente reprimindo a expressão. Referências relacionadas: PMID:24207025 PMID:26124092
• Além disso, a RPB1 pode funcionar como uma RNA dependente da RNA polimerase, estendendo RNAs não codificantes, e atua na replicação do vírus da hepatite delta.
• Localização subcelular: predominantemente nuclear, mas também encontrada no citoplasma e associada a cromossomos.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• Ao realizar Western blot, certifique-se que os tampões de lise contenham inibidores de fosfatases para preservar a fosforilação do CTD. Inclua um controle tratado com fosfatase para confirmar a fosfo-especificidade.
• Para imunoprecipitação de cromatina (ChIP) e CUT&Tag, este anticorpo pode ajudar a mapear a ocupação da RNA polimerase II e os padrões de fosforilação de Ser2/Ser5 em todo o genoma.
• No ELISA, o anticorpo pode ser usado para quantificar os níveis de phospho-POLR2A em lisados ou amostras purificadas.

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