Anticorpo Policlonar de Coelho Phospho-Smad2-S465/467 + Smad3-S423/425 para WB, IF/ICC, IHC-P, ELISA - Q15796 / P84022

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização de SMAD2 e SMAD3

• SMAD2 é um SMAD regulado por receptor (R-SMAD) que atua como transdutor de sinal intracelular para as vias de TGF-beta e activina.
• Após a ligação do ligante, as quinases do receptor tipo 1 fosforilam SMAD2 no motivo C-terminal SSXS (Ser465 e Ser467), desencadeando sua ativação, formação de complexo com SMAD4 e translocação nuclear.
• No núcleo, o complexo SMAD2/SMAD4 se liga ao elemento responsivo a TGF-beta (TRE) nos promotores dos genes alvo e regula a transcrição.
• SMAD2 pode funcionar como supressor tumoral no carcinoma colorretal. Referências relacionadas: PMID:8752209
• É altamente expresso no músculo esquelético, células endoteliais, coração e placenta.
• SMAD3 é um homólogo próximo de SMAD2 e compartilha mecanismos de ativação semelhantes. O anticorpo detecta a fosforilação nos sítios correspondentes Ser423/425 em SMAD3.
• As principais modificações pós-traducionais incluem fosforilação, acetilação e ubiquitinação; SMAD2 também contém um sítio de ligação a zinco.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um fosfopeptídeo sintético direcionado ao motivo de dupla fosforilação, proporcionando especificidade para as formas ativadas de SMAD2 e SMAD3. Verifique a fosfo-especificidade usando amostras tratadas com fosfatase.
• Para Western blot, inclua inibidores de fosfatase durante a lise para preservar a fosforilação e considere o uso de amostras frescas. Os pesos moleculares previstos de SMAD2 e SMAD3 são em torno de 48-52 kDa, mas múltiplas bandas podem aparecer devido à fosforilação e às isoformas.
• Para imunofluorescência e imunohistoquímica, a fixação padrão com 4% de PFA e permeabilização com Triton X-100 pode ser adequada; otimize a recuperação de antígeno para IHC-P.
• O ELISA pode ser usado para triagem de alto rendimento da ativação da via TGF-beta; o teste de reatividade cruzada é recomendado para estudos com múltiplas espécies.
• Sempre inclua controles positivos e negativos adequados (por exemplo, células tratadas com TGF-beta vs. células não tratadas) para confirmar a fosfo-especificidade.

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