pAb de coelho Phospho-Smad2-S465/S467 para WB, ELISA - Q15796

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do Smad2

• Smad2, também conhecido como MADH2, MADR2 ou JV18-1, é um membro da família SMAD regulada por receptor (R-SMAD), atuando como transdutor de sinal intracelular a jusante dos receptores de TGF-beta e activina.
• Após fosforilação em S465 e S467 por cinases de receptor tipo 1, Smad2 forma um complexo com Smad4, transloca para o núcleo e se liga ao elemento TRE para regular a transcrição de genes responsivos ao TGF-beta.
• Smad2 promove a transcrição mediada por TGFB1 de genes de diferenciação odontoblástica em células da papila dentária e regula positivamente a atividade da cinase PDPK1 ao dissociá-la de YWHAQ (proteína 14-3-3).
• Pode funcionar como supressor tumoral no carcinoma colorretal (PubMed:8752209). Referências relacionadas: PMID:8752209
• A localização subcelular é principalmente citoplasmática em condições basais, mas ele migra para o núcleo após ativação, o que é consistente com seu papel na transdução de sinais.
• As modificações pós-traducionais incluem fosforilação (crítica para ativação), acetilação e ubiquitinação (conjugação Ubl). A proteína contém um domínio de ligação a zinco e sofre splicing alternativo.
• Smad2 é altamente expresso no músculo esquelético, células endoteliais, coração e placenta, o que reflete seu amplo papel no desenvolvimento e na homeostase tecidual.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo fosforilado sintético que compreende S465 e S467 do Smad2 humano; portanto, o anticorpo provavelmente reconhece a forma duplamente fosforilada (ativa). Para preservar a fosforilação do epítopo, adicione inibidores de fosfatase durante a preparação da amostra.
• Para Western blot (WB), use SDS-PAGE redutor e transfira para PVDF; considere otimizar o bloqueio e a diluição do anticorpo usando lisados de células relevantes tratados com TGF-beta1 ou um controle de inibidor de fosfatase.
• Para ELISA, use um sistema de detecção fosfo-específico e valide com ensaios de competição por peptídeo para confirmar a especificidade.
• Valide a reatividade cruzada com amostras de camundongo, pois a reatividade é prevista; realize um alinhamento do epítopo específico por espécie, se necessário para outras espécies.

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