Anticorpo monoclonal de coelho Phospho-Smad5 (S463/S465) para WB, ELISA - Q99717

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do Smad5

• SMAD5 (Mothers against decapentaplegic homolog 5, também conhecido como JV5-1, MADH5) é um regulador transcripcional pertencente à família SMAD. Ele desempenha papéis essenciais no desenvolvimento embrionário, diferenciação celular, angiogênese e homeostase tecidual. Referências relacionadas: PMID:12064918 PMID:16516194

• Após estimulação pelo ligante BMP, SMAD5 é fosforilado em Ser463 e Ser465 por receptores BMP de tipo I ativados. Essa fosforilação promove sua associação com SMAD4 para formar um complexo heteromérico que se transloca para o núcleo, onde regula a expressão gênica ao se ligar aos Elementos de Ligação a Smad (SBEs) nas regiões promotoras. Referências relacionadas: PMID:9442019 PMID:33510867

• Além do seu papel como fator de transcrição, SMAD5 não fosforilado atua no citoplasma para regular o metabolismo energético. Ele aumenta a respiração mitocondrial e a glicólise ao interagir com a hexocinase 1 (HK1), acelerando assim a glicólise em resposta a alterações no pH citoplasmático. Referências relacionadas: PMID:28675158

• A proteína se localiza no citoplasma, núcleo e mitocôndria, refletindo seus papéis diversificados na sinalização e no metabolismo.

• SMAD5 é expresso de forma ubíqua, consistente com seu envolvimento generalizado em processos celulares fundamentais.

• As principais modificações pós-traducionais incluem a fosforilação em S463/S465 (crítica para a ativação) e a acetilação. A proteína contém domínios de ligação a zinco e foi confirmada por sequenciamento direto de proteína.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo fosforilado sintético que abrange o sítio de dupla fosforilação (S463/S465). Considere usar controles de bloqueio com peptídeo não fosforilado para confirmar a especificidade da fosforilação em Western blot.
• Para Western blot, o peso molecular previsto é de 52 kDa. Valide a banda em linhagens celulares humanas relevantes tratadas com ligantes BMP para induzir a fosforilação do Smad5. Lisados não tratados ou tratados com fosfatase podem servir como controles negativos.
• Em aplicações de ELISA, titule o anticorpo para determinar a concentração de trabalho ideal. Placas revestidas com fosfopeptídeo podem aumentar a especificidade.
• Como SMAD5 é ubíquo, garanta que o preparo da amostra e os controles de carregamento sejam consistentes entre tecidos ou tipos celulares.

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