pAb de coelho contra Phospho-SMO-S616 - Q99835

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Proteína smoothened

• A proteína smoothened (SMO), também conhecida como Proteína Gx, é um receptor acoplado à proteína G (GPCR) que atua como transdutor central da via de sinalização hedgehog, essencial para o desenvolvimento embrionário e implicada no câncer. Referências relacionadas: PMID:19592253, PMID:27437577, PMID:28344083
• O SMO é ativado pela ligação do colesterol após estimulação pelo ligante hedgehog, levando à inibição mediada pela proteína G(i) da adenilato ciclase e à redução dos níveis de AMPc, que por sua vez libera os fatores de transcrição GLI para regular a expressão de genes alvo. Referências relacionadas: PMID:28344083, PMID:31168089
• Além da modulação canônica do AMPc, o SMO ativo sequestra e inibe diretamente a subunidade catalítica da proteína quinase A (PKA) PRKACA na membrana celular, evitando a fosforilação e o processamento dos fatores de transcrição GLI. Referências relacionadas: PMID:36202993, PMID:39138140
• O SMO também facilita a remoção de GPR161, um regulador negativo chave, do cílio primário, garantindo uma ativação robusta da via (por similaridade). O SMO se localiza na membrana celular e está enriquecido na membrana do cílio primário, um nicho subcelular crítico para a transdução de sinal.
• A proteína sofre modificações pós-traducionais por fosforilação (incluindo em Ser616), glicosilação, lipidação (ligação ao colesterol) e formação de pontes dissulfeto, conforme indicado pelas palavras-chave do UniProt, e é classificado como um receptor transmembrana envolvido na sinalização do desenvolvimento.
• A disfunção do SMO está associada a distúrbios do desenvolvimento e câncer; sua atividade é rigorosamente regulada pelo inibidor a montante patched (PTCH1/2) e pelo acesso ao colesterol.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo fosforilado sintético ao redor da Ser616 do SMO humano, garantindo especificidade para a forma fosforilada; a reatividade cruzada com a forma não fosforilada deve ser avaliada em controles negativos.
• Para Western blot (WB), é esperada uma banda em torno de 86 kDa; otimize o bloqueio e a diluição do anticorpo para reduzir o fundo causado pela expressão endógena de SMO.
• Em ELISA e dot blot (DB), use peptídeo fosforilado como controle positivo e peptídeo não fosforilado para confirmar a especificidade à fosforilação; considere ensaios de competição com peptídeo para validação.
• Como o SMO se localiza nos cílios, a imunodetecção em lisados de células inteiras pode ser um desafio; considere estratégias de enriquecimento ou imunofluorescência para estudos de localização ciliar.
• O anticorpo tem reatividade cruzada com o SMO humano; para outras espécies, verifique a homologia de sequência no sítio de fosforilação antes do uso.

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