pAb de coelho Phospho-Src-Y529 para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P12931

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do Src

• A tirosino quinase Src do proto-oncogene (c-Src) é uma quinase tirosina não receptor de ~60 kDa, codificada pelo gene SRC (ID do gene: 6714). Outros nomes incluem ASV, SRC1, THC6 e p60-Src. Três isoformas surgem de splicing alternativo, sendo a isoforma 1 a sequência canônica.
• O Src medeia a transdução de sinal de diversos tipos de receptores (imunes, integrinas, fatores de crescimento, GPCRs), controlando a transcrição gênica, resposta imune, adesão celular, progressão do ciclo, apoptose, migração e transformação (PubMed:34234773, PubMed:21411625). Referências relacionadas: PMID:34234773, PMID:21411625
• Através da fosforilação de substratos como AFAP1, cortactina (CTTN), FAK (PTK2) e paxilina, o Src orquestra a reorganização do citoesqueleto, a dinâmica das adesões focais e a sinalização nas junções celulares.
• O Src se localiza na membrana celular, membrana interna mitocondrial, núcleo, citoplasma, citoesqueleto e junções celulares, permitindo sinalização espacialmente restrita.
• O anticorpo reconhece especificamente o Src fosforilado em Tyr529, um resíduo conservado na cauda C-terminal cuja fosforilação pela quinase Csk mantém a conformação fechada autoinibida. A desfosforilação ou deslocamento da interação pTyr529–SH2 prepara o Src para ativação.
• A expressão do Src é ubíqua; no entanto, plaquetas, neurônios e osteoclastos exibem níveis 5 a 200 vezes mais altos do que na maioria dos outros tecidos. A expressão também foi detectada na pele (PubMed:22294297). Referências relacionadas: PMID:22294297
• Nos osteoclastos, o Src é essencial para a reabsorção óssea, atuando através de um complexo PTK2B/PYK2 e fosforilando CBL para ativar a sinalização PI3K (PubMed:14585963, PubMed:8755529). Ele também promove a produção de energia ao ativar a citocromo c oxidase (PubMed:12615910). Referências relacionadas: PMID:14585963, PMID:8755529, PMID:12615910
• O Src participa da imunidade inata antiviral ao potencializar a sinalização mediada por RIG-I (PubMed:19419966) e medeia a regeneração epitelial induzida por IL6 através da via YAP1‑NOTCH (PubMed:25731159). Referências relacionadas: PMID:19419966, PMID:25731159

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um fosfopetídeo sintético correspondente à região Y529; certifique-se que a preparação da amostra preserve a fosforilação (use inibidores de fosfatases) e inclua controles não fosforilados para verificar a especificidade.
• Para Western blot, o peso molecular previsto do Src é ~60 kDa; uma banda nesse tamanho deve ser observada. Considere o uso de bloqueio com BSA a 5% para reduzir a ligação não específica.
• Em IHC‑P e IF/ICC, os métodos de recuperação de antígeno podem afetar a preservação do fosfoepítopo; recomenda-se recuperação suave baseada em citrato e processamento em baixa temperatura.
• A detecção por ELISA do Phospho‑Src‑Y529 pode ser usada em combinação com anticorpos contra Src total para avaliar níveis de fosforilação sítio-específicos em lisados celulares.
• A reatividade cruzada com Src de camundongo e rato é esperada com base na homologia de sequência; valide no sistema de amostra relevante.

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