Phospho-TIFA-T9 Coelho pAb para WB e ELISA - Q96CG3

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da TIFA

• TIFA (Proteína A que interage com TRAF contendo domínio FHA) também é conhecida como T2BP, T6BP, TIFAA, PM14 e proteína ativadora de NF‑kappa‑B 20. Contém um domínio forkhead‑associated (FHA) que media interações dependentes de fosforilação.
• A TIFA serve como uma molécula adaptadora que desempenha um papel fundamental na ativação da sinalização pró-inflamatória de NF‑kappa‑B após a deteção de padrões moleculares associados a patógenos bacterianos (PAMPs). Referências relacionadas: PMID:12566447, PMID:15492226, PMID:26068852
• Após a deteção de ADP‑heptose (um PAMP bacteriano) pela quinase ALPK1, a ALPK1 fosforila a TIFA na Thr‑9, levando à sua homooligomerização. Referências relacionadas: PMID:30111836
• A TIFA fosforilada e oligomerizada promove a oligomerização e poliubiquitinação da TRAF6, que por sua vez ativa a TAK1 e a IKK, impulsionando a transcrição mediada por NF‑kappa‑B de citocinas.
• A TIFA está predominantemente localizada no citoplasma, consistente com o seu papel na transmissão de sinais de sensores citoplasmáticos de patógenos para cascatas de quinases a jusante.
• Modificação pós-traducional: a fosforilação na Thr‑9 é o evento crítico que inicia a auto-associação e função de sinalização da TIFA.
• Palavras-chave UniProt: Estrutura 3D, Citoplasma, Imunidade, Imunidade inata, Fosfoproteína, Proteoma de referência.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunogénio é um péptido sintético fosforilado em torno da Thr‑9 da TIFA humana; portanto, espera-se que o anticorpo reconheça especificamente a forma fosforilada na Thr‑9. Para western blotting, inclua inibidores de fosfatase durante a preparação da amostra e considere usar um controlo de desfosforilação para confirmar a especificidade.
• Para aplicações de ELISA, o anticorpo pode ser usado como reagente de captura ou deteção; valide o emparelhamento com anticorpos secundários apropriados e otimize as condições de revestimento para o seu formato de antigénio.
• Um controlo positivo para a fosforilação da TIFA pode ser gerado tratando células com ADP‑heptose ou sobreexprimindo ALPK1, o que induz potentemente a fosforilação da Thr‑9.
• Dado o baixo peso molecular da TIFA (21 kDa), use géis de SDS‑PAGE com alta porcentagem (12–15%) para uma separação e transferência ótimas.

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