Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-Fosfo-Ubiquitina (Ser65) para WB, IF/ICC, ELISA - P62979 / P62987 / P0CG47 / P0CG48

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Ubiquitina

• A ubiquitina é uma proteína de 76 aminoácidos altamente conservada, frequentemente expressa como uma proteína de fusão com a proteína ribossomal eS31 (gene RPS27A) e clivada para gerar ubiquitina livre e o componente ribossomal.
• A ubiquitina pode ser conjugada a proteínas alvo por meio de ligações isopeptídicas, formando monômeros ou cadeias de poliubiquitina ligadas por diferentes resíduos de lisina; cadeias ligadas em Lys‑48 direcionam proteínas para degradação pelo proteassoma, enquanto cadeias ligadas em Lys‑63 medeiam endocitose, reparo de DNA e sinalização por NF‑κB.
• Como parte da subunidade 40S do ribossomo, a proteína de fusão ubiquitina-ribossomo participa da biogênese de ribossomos e do processamento de pré-RNAr dentro do nucléolo. Referências relacionadas: PMID:9582194, PMID:23636399, PMID:34516797
• A ubiquitina sofre várias modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação, acetilação e ADP-ribosilação, que modulam suas funções celulares.
• A proteína de fusão também atua como uma proteína ribossomal ligante de zinco, contendo um motivo dedo de zinco do tipo C4.
• A localização subcelular inclui citoplasma, núcleo e nucléolo, o que é consistente com seus papéis tanto na degradação de proteínas citosólica quanto na montagem de ribossomos nuclear.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• Devido à natureza lábil da fosforilação, adicione inibidores de fosfatase durante a preparação da amostra para preservar o epítopo de fosfo-Ser65.
• Verifique a especificidade do anticorpo por meio do tratamento de lisados com fosfatase ou competição com peptídeo não fosforilado.
• Múltiplas bandas podem ser detectadas porque a ubiquitina é conjugada a inúmeras proteínas alvo; os pesos moleculares previstos incluem ubiquitina livre (~8,5 kDa) e conjugados de maior peso molecular (bandas observadas em ~15, 18, 26 e 77 kDa).
• Para imunofluorescência, otimize as condições de fixação e permeabilização para reter o sinal de fosforilação.

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