PLOD3 Rabbit mAb - O60568

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do PLOD3

• Identidade e função da proteína: O PLOD3, também conhecido como LH3 (lisil hidroxilase 3), é uma enzima multifuncional que realiza modificações pós-traducionais críticas nos resíduos de lisina do colagénio.
• Atividade hidroxilase: Catalisa a hidroxilação da lisina em motivos -Xaa-Lys-Gly- dos procolagénios, gerando hidroxilisina. Este passo é essencial para a estabilidade térmica do colagénio e para a formação de ligações cruzadas. Referências relacionadas: PMID:11956192, PMID:12475640, PMID:18298658
• Atividades glicosiltransferase: Após a hidroxilação, a enzima adiciona sequencialmente galactose e glucose à hidroxilisina, formando 1,2-glicosilgalactosil-5-hidroxilisina. Estes eventos de glicosilação são indispensáveis para a secreção do colagénio tipo IV, montagem da membrana basal e também ocorrem no domínio tipo colagénio da MBL1. Referências relacionadas: PMID:12475640, PMID:18298658, PMID:18834968, PMID:10934207, PMID:11896059, PMID:11956192, PMID:25419660
• Localização subcelular: O PLOD3 reside predominantemente no lúmen e na membrana do retículo endoplasmático rugoso (RE), com uma pequena fração secretada para o espaço extracelular. Isto é consistente com o seu papel no processamento do colagénio dentro da via secretora.
• Distribuição tecidular: Expresso ubiquitousamente, com níveis mais elevados no coração, placenta e pâncreas, e níveis mais baixos no pulmão, fígado e músculo esquelético. Referências relacionadas: PMID:9582318, PMID:9724729
• Requisitos de cofatores: O domínio hidroxilase depende de Fe²⁺, 2-oxoglutarato, O₂ e ascorbato (vitamina C), enquanto as atividades glicosiltransferase provavelmente requerem Mn²⁺.
• Características estruturais: A enzima é ela própria uma glicoproteína com ligações dissulfeto intramoleculares.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Western blotting: Em condições redutoras e desnaturantes, deve ser observada uma banda específica em aproximadamente 85 kDa. Utilize uma carga proteica adequada e valide com uma linhagem celular ou lisado de tecido relevante que expresse PLOD3.
• Imuno-histoquímica (parafina): Recomenda-se a recuperação padrão de antigénio (por exemplo, tampão citrato, pH 6,0) e passagens de bloqueio. Aconselha-se a otimização da concentração do anticorpo primário e do sistema de deteção.
• ELISA: O anticorpo pode ser utilizado em formatos ELISA direto ou de captura. Deve ser realizada a titulação tanto do antigénio de revestimento como da concentração do anticorpo para determinar as condições ótimas.
• Considerações sobre o imunogénio: Este anticorpo foi produzido contra uma proteína recombinante que abrange os aminoácidos 25–306 (região N-terminal). Pode detetar tanto o PLOD3 de comprimento total como potenciais fragmentos N-terminais.

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