pAb de coelho anti-pró-glucagon para WB, IF-P, IHC-P, ELISA - P01275

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização do pró-glucagon

• O pró-glucagon é uma proteína precursora que sofre processamento pós-traducional específico de cada tecido para gerar vários hormônios peptídicos, incluindo glucagon, peptídeo semelhante ao glucagon-1 (GLP-1), peptídeo semelhante ao glucagon-2 (GLP-2) e polipeptídeo pancreático relacionado à glicentina (GRPP).
• O glucagon desempenha um papel fundamental no metabolismo e na homeostase da glicose. Ele atua como um hormônio contrarregulador da insulina, elevando os níveis de glicose plasmática ao promover a gliconeogênese e a glicogenólise. O glucagon liga-se ao receptor de glucagon GCGR e o ativa; esse receptor se acopla à proteína G(s) e eleva os níveis intracelulares de AMPc, desencadeando respostas metabólicas a jusante. Referências relacionadas: PMID:32193322
• O GLP-1 é um potente estimulador da secreção de insulina dependente de glicose e também aumenta a liberação de insulina em resposta à IL-6. Ele suprime os níveis plasmáticos de glucagon, inibe a motilidade gástrica, promove a saciedade e pode contribuir para a eliminação da glicose nos tecidos periféricos. O GLP-1 também exerce efeitos promotores do crescimento no epitélio intestinal e aumenta a proliferação das células beta pancreáticas, enquanto inibe a apoptose. Referências relacionadas: PMID:22037645 PMID:40446798 PMID:10605628 PMID:14719035 PMID:12554744
• O GLP-2 estimula o crescimento intestinal, aumentando a altura das vilosidades e a proliferação das células das criptas, enquanto reduz a apoptose dos enterócitos. Ele melhora a assimilação de nutrientes ao aumentar a regulação do transporte intestinal de glicose e reduzir a permeabilidade da mucosa.
• O GLP-1 reduz significativamente a ingestão de alimentos e inibe o esvaziamento gástrico, contribuindo para o aumento da distensão gástrica e para a sensação de saciedade.
• Os peptídeos derivados do pró-glucagon são secretados pelas células A das ilhotas de Langerhans pancreáticas (glucagon) e pelas células L enteroendócrinas ao longo do trato gastrointestinal (GLP-1 e GLP-2). Eles também são expressos em neurônios selecionados do cérebro.
• As modificações pós-traducionais do pró-glucagon incluem clivagem em resíduos básicos pareados, amidamento C-terminal e fosforilação, que são essenciais para a geração de hormônios ativos.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno corresponde aos aminoácidos 21-89 do pró-glucagon humano, tendo como alvo a região N-terminal do precursor. Essa região pode reconhecer tanto o pró-glucagon de comprimento completo (aproximadamente 21 kDa) quanto potencialmente alguns fragmentos processados, dependendo da preparação da amostra e da especificidade do anticorpo.
• Para Western blotting (WB), considere utilizar condições de amostra reduzidas e validar o anticorpo em lisados celulares ou teciduais relevantes conhecidos por expressarem pró-glucagon (por exemplo, ilhotas pancreáticas ou células L intestinais). O peso molecular esperado do pró-glucagon é de 21 kDa; no entanto, formas endógenas processadas podem aparecer com pesos moleculares menores.
• Na imunofluorescência (IF) e na imuno-histoquímica (IHC), o pró-glucagon é secretado; portanto, a coloração pode apresentar padrões citoplasmáticos granulares ou vesiculares. Utilize tecidos de controle positivo adequados, como pâncreas ou intestino.
• Para ELISA, o formato policlonal oferece alta sensibilidade, mas a reatividade cruzada com peptídeos derivados do pró-glucagon deve ser avaliada utilizando antígenos purificados. Considere realizar testes em pares com um anticorpo monoclonal de captura caso seja desejado um ensaio específico.

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