Anticorpo Monoclonal Coelho anti-Humano CD146 para FC - P43121

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do CD146

• O CD146, também designado MUC18 ou MCAM, é uma glicoproteína de superfície celular pertencente à superfamília das imunoglobulinas, codificada pelo gene MCAM (GeneID: 4162). A splicing alternativa produz múltiplas isoformas.
• Ele medeia a adesão celular independente de cálcio e contribui para a integridade da monocamada endotelial nas junções intercelulares do tecido vascular.
• No melanoma, acredita-se que a expressão de CD146 permita que as células tumorais interajam com o endotélio vascular, promovendo assim a disseminação hematogênica e a metástase.
• A proteína funciona como um receptor de superfície, e a ligação ao ligante desencadeia a fosforilação de tirosina de FYN e PTK2/FAK1, juntamente com um aumento transitório nos níveis de cálcio intracelular.
• Durante a embriogênese, o CD146 pode atuar como uma molécula de adesão que guia a migração das células da crista neural.
• Estudos de imunolocalização detectam CD146 na membrana plasmática; sua região extracelular contém domínios semelhantes a imunoglobulinas, sítios de glicosilação N-ligada e pontes dissulfeto, enquanto a cauda citoplasmática sofre fosforilação.
• O peso molecular previsto é de aproximadamente 71,6 kDa; no entanto, a proteína glicosilada madura migra como uma banda de 57 a 71 kDa em SDS-PAGE.
• Em tecidos adultos normais, o CD146 está restrito a células do músculo liso e células endoteliais, mas é fortemente up-regulado em melanomas primários avançados e lesões metastáticas, tornando-se um marcador de progressão tumoral.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno (aa 24-559) cobre todo o domínio extracelular do CD146 humano, portanto, espera-se que este anticorpo reconheça a proteína nativa da superfície celular em células vivas não fixadas — um requisito fundamental para aplicações de citometria de fluxo.
• Faça a titulação do anticorpo no seu ensaio de citometria de fluxo para estabelecer uma concentração ótima que proporcione uma separação clara entre as populações positivas e negativas.
• Inclua sempre controles de isotipo adequados, controles de compensação monocromáticos e um corante de viabilidade para excluir células mortas da análise.
• Valide a coloração em linhas celulares que expressam CD146 bem caracterizadas (ex.: melanoma A375) ou em amostras de tumor primário com up-regulação conhecida de MCAM.
• Como o é um fluoróforo sensível à luz, armazene o conjugado protegido da luz, evite ciclos repetidos de congelamento e descongelamento e realize uma centrifugação breve antes de cada uso para remover agregados.

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