Anticorpo Monoclonal de Coelho anti-Humano CD28 para Citometria de Fluxo e Estimulação de Células T - P10747

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do CD28

• O CD28 (glicoproteína de superfície específica de células T CD28, também conhecida como Tp44) é um membro da superfamília das imunoglobulinas e funciona como um receptor de coestimulação essencial para a ativação, proliferação e sobrevivência das células T.
• O engajamento do CD28 pelos seus ligantes CD80 (B7-1) ou CD86 (B7-2) fornece um segundo sinal crítico que amplifica a sinalização do receptor de células T (TCR), levando à produção aumentada de interleucina-2 (IL-2) e à expansão das células T. Referências relacionadas: PMID:1650475, PMID:12196291, PMID:35397202
• A sinalização do CD28 recruta a proteína quinase C-teta (PRKCQ) e o adaptador GRB2, ativando o NF-κB por vias dependentes e independentes de PI3K/Akt para modular a expressão gênica nas células T. Referências relacionadas: PMID:24665965, PMID:21964608, PMID:7568038
• Em conjunto com a coestimulação de TCR/CD3 e CD40L, o CD28 aumenta a produção das citocinas Th2 IL-4 e IL-10, contribuindo para as respostas imunes humorais. Referências relacionadas: PMID:8617933
• O CD28 sinergiza com o CD40L para ativar o NF-κB e as quinases a jusante MAPK8 e PAK2, diversificando ainda mais as funções efetoras das células T. Referências relacionadas: PMID:15067037
• O CD28 é predominantemente expresso na superfície celular de células T e células plasmáticas, mas está ausente em células B menos maduras.
• A proteína CD28 é uma glicoproteína transmembrana com um domínio extracelular semelhante à imunoglobulina, uma única hélice transmembrana e uma cauda citoplasmática contendo motivos de sinalização. As modificações pós-traducionais incluem ligações dissulfeto, glicosilação e fosforilação.
• O splicing alternativo gera múltiplas isoformas de CD28, que podem refinar os sinais de coestimulação em diferentes subconjuntos de células T.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno, proteína recombinante do CD28 humano, provavelmente cobre o domínio extracelular, tornando o anticorpo adequado para detectar o CD28 de superfície celular nativo por citometria de fluxo. Titule em linhagens de células T humanas ou PBMCs para determinar a diluição de trabalho ideal.
• Para ativação de células T in vitro, use o anticorpo em combinação com o anti-CD3 para fornecer sinais de coestimulação. Formatos ligados à placa ou reticulados podem aumentar o agrupamento; experimentos piloto devem otimizar a concentração e a duração da estimulação.
• Ao usar este anticorpo para bloqueio funcional ou depleção, pré-incube com a proteína recombinante CD28 para confirmar a especificidade dos efeitos observados.
• As estratégias de gating para citometria de fluxo devem incluir discriminação de vivos/mortos e controles de isotipo apropriados para quantificar com precisão a expressão de CD28 em subconjuntos de células T.
• Valide a reatividade cruzada em seu sistema experimental; relata-se que o anticorpo reage com o CD28 humano, mas a ligação fora do alvo deve ser descartada no contexto da amostra relevante.

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