Anticorpo Monoclonal Coelho anti-Humano CD33 para Citometria de Fluxo - P20138

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do CD33

• O antígeno de superfície de células mieloides CD33 (Siglec-3, gp67) é um receptor transmembranar de tipo 1 pertencente à família das lectinas do tipo imunoglobulina de ligação ao ácido siálico (Siglec). É codificado pelo gene CD33.
• O CD33 medeia interações célula-célula e mantém as células imunes em estado de repouso ao reconhecer e ligar preferencialmente glicanos com ácido siálico ligados em alfa-2,3 e alfa-2,6. Referências relacionadas: PMID:10611343, PMID:11320212, PMID:15597323, PMID:7718872
• Após o acoplamento ao ligante (por exemplo, C1q ou glicoproteínas sialiladas), os motivos inibitórios baseados em tirosina associados a imunorreceptores (ITIMs) na cauda citoplasmática são fosforilados por quinases do tipo Src, como a LCK, criando sítios de acoplamento para as proteína-tirosina fosfatases PTPN6/SHP-1 e PTPN11/SHP-2. Referências relacionadas: PMID:10887109, PMID:28325905, PMID:10206955, PMID:10556798
• As fosfatases recrutadas desfosforilam moléculas de sinalização a jusante, com um efeito repressivo dependente da fosfoinositida 3-quinase/PI3K. Referências relacionadas: PMID:15597323
• O CD33 é expresso predominantemente na superfície de células das linhagens monocítica e mieloide (monócitos, macrófagos, granulócitos) e, no cérebro, nas células micrógliais.
• Subcelularmente, o CD33 se localiza na membrana celular e nos peroxissomos. Ele contém um peptídeo sinal, um domínio V do tipo imunoglobulina e uma hélice transmembranar.
• A proteína sofre splicing alternativo e modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação, glicosilação N-ligada e formação de pontes dissulfeto. O peso molecular previsto é de aproximadamente 39,8 kDa, mas são observadas múltiplas bandas (25 kDa, 33 kDa, 39 kDa) devido à glicosilação diferencial e à expressão de isoformas.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno (aminoácidos 18-259) abrange todo o domínio extracelular do CD33 humano, favorecendo o reconhecimento da forma nativa do receptor na superfície celular.
• Para citometria de fluxo, titule o anticorpo para determinar a concentração ideal. Use linhas celulares conhecidas por serem positivas para CD33 (por exemplo, THP-1, U937) ou monócitos de sangue periférico humano como controles positivos.
• O conjugado permite detecção direta sem a necessidade de reagentes secundários. Proteja o anticorpo da luz e evite ciclos repetidos de congelamento e descongelamento para manter a intensidade da fluorescência.
• Se for necessária coloração intracelular (por exemplo, para localização peroxissomal), considere protocolos de fixação e permeabilização compatíveis com o fluoróforo.

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