Anticorcorpo Monoclonal Coelho anti-Humano CD62E/E-Selectina para Citometria de Fluxo - P16581

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da E-Selectina

• A E-selectina, também conhecida como CD62E, ELAM-1 ou LECAM2, é uma glicoproteína de superfície celular codificada pelo gene SELE. Pertence à família das selectinas de moléculas de adesão, caracterizada por um domínio de lectina no terminal N, um domínio semelhante ao EGF e múltiplas repetições sushi (proteínas de controle do complemento).
• A função primária da E-selectina é mediar a adesão de leucócitos ao endotélio ativado durante a inflamação. Reconhece e liga-se a ligandos de carboidratos específicos, notadamente o sialil-Lewis X, em neutrófilos, monócitos e células T de memória.
• A E-selectina não é expressa constitutivamente; a sua transcrição é induzida por citocinas como o fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) e a interleucina-1 (IL-1). Esta expressão estritamente regulada assegura uma resposta de adesão rápida e transitória nos locais de lesão ou infeção.
• Para além do seu papel na vigilância imunitária, a E-selectina tem sido implicada na morfogénese capilar, sugerindo uma função na angiogénese e remodelação vascular.
• A proteína é uma glicoproteína transmembrana do tipo I, ancorada na membrana plasmática com os seus domínios de ligação ao ligando expostos na superfície celular. A sua região extracelular contém múltiplos domínios estabilizados por ligações dissulfeto e locais de ligação ao cálcio.
• As características estruturais chave incluem um domínio de lectina do tipo C no terminal N responsável pelo reconhecimento de carboidratos dependente do cálcio, seguido por um único domínio semelhante ao fator de crescimento epidérmico (EGF) e seis repetições de consenso curtas (domínios sushi). A cauda citoplasmática curta pode interagir com o citoesqueleto e moléculas de sinalização intracelular.
• A E-selectina sofre modificações pós-traducionais, incluindo N-glicosilação e a formação de ligações dissulfeto intracadeia, que são críticas para o seu correto dobramento e atividade de ligação ao ligando.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Este anticorpo foi desenvolvido usando um imunogénio correspondente à região extracelular (aminoácidos 22-230) da E-selectina humana, que abrange os domínios de lectina e semelhante ao EGF. Este design favorece epítopos acessíveis em conformações nativas, tornando o clone bem adequado para aplicações de citometria de fluxo.
• Para a coloração por citometria de fluxo, use uma suspensão de células únicas preparada a partir de células endoteliais ativadas ou populações de leucócitos. Considere titular o anticorpo para determinar a razão ideal sinal-ruído para o seu sistema modelo específico.
• Inclua controlos de isótipo apropriados e discriminação de células vivas/mortas para garantir a especificidade. A expressão da E-selectina pode ser baixa em células em repouso, pelo que a estimulação com citocinas (por exemplo, tratamento com TNF-α) é recomendada para aumentar a expressão do alvo.
• O conjugado é compatível com linhas de laser vermelho/laranja comuns (por exemplo, 561 nm ou 594 nm) e pode ser combinado com outros fluoróforos em painéis multicoloridos. Valide as definições de compensação de sobreposição espectral no seu instrumento.
• Proteja sempre os anticorpos conjugados da luz e evite ciclos repetidos de congelação-descongelação para manter a estabilidade do fluoróforo.

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