Anticorpo monoclonal de coelho anti-DC-SIGNR/CD299 humano para citometria de fluxo - Q9H2X3

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização de DC-SIGNR

• DC-SIGNR (CD299), codificado pelo gene CLEC4M, é um receptor de lectina do tipo C transmembranar do tipo II. O splicing alternativo produz isoformas tanto ligadas à membrana quanto secretadas, e a proteína atua na vigilância imunológica e no reconhecimento de patógenos.
• Atua como um receptor de reconhecimento de patógenos (PRR) capaz de se ligar a carboidratos ricos em manose presentes nos patógenos, mediando sua endocitose e subsequente degradação nos lisossomos. DC-SIGNR também se liga a ICAM3 nas células T, facilitando as interações imunológicas.
• Atua como receptor de adesão para uma ampla variedade de vírus, incluindo HIV-1, vírus da hepatite C (HCV), SARS-CoV, vírus Ebola, vírus da influenza, coronavírus humano 229E, citomegalovírus, vírus do Nilo Ocidental, vírus da encefalite japonesa e vírus de Marburg, destacando seu papel na patogênese viral.
• A expressão tecidual ocorre predominantemente nas células endoteliais sinusoidais do fígado, nos linfonodos, no endotélio placentário, nas células alveolares do tipo II e nas células endoteliais pulmonares. Notavelmente, está ausente nos macrófagos, distinguindo-o de seu homólogo próximo, DC-SIGN.
• O domínio extracelular (aminoácidos 71–399) contém uma região de repetições em tandem e um domínio de reconhecimento de carboidratos de lectina do tipo C (CRD), que se liga a resíduos de manose de maneira dependente de cálcio, sendo essencial para a interação com patógenos.
• As modificações pós-traducionais incluem glicosilação ligada a N e formação de pontes dissulfeto, essenciais para o dobramento adequado, a estabilidade e a atividade de ligação ao ligante.
• Subcelularmente, DC-SIGNR localiza-se principalmente na membrana plasmática, mas uma forma solúvel secretada, gerada por splicing alternativo, também é encontrada nos fluidos extracelulares.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno abrange todo o domínio extracelular (aa 71–399), garantindo que o anticorpo reconheça a conformação nativa e o domínio de reconhecimento de carboidratos de DC-SIGNR. Isso o torna adequado para detectar tanto as formas ligadas à membrana quanto as formas secretadas.
• Para citometria de fluxo (FC), considere utilizar células endoteliais sinusoidais do fígado humano ou linhagens celulares transfectadas com CLEC4M como controles positivos. Inclua um controle de isotipo apropriado e bloqueio dos receptores Fc para minimizar a ligação inespecífica.
• O conjugado proporciona fluorescência intensa com fotobranqueamento mínimo; titule o anticorpo para determinar a concentração ideal para suas células e configurações do instrumento. Realize a compensação adequada ao utilizar painéis multicoloridos.
• Como DC-SIGNR pode ser liberado da superfície celular, avalie a marcação de superfície em comparação com a marcação total após permeabilização, se necessário, para detectar os reservatórios intracelulares ou secretados.

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