Anticorpo Monoclonal de Coelho anti-LAMP2 Humano para IF/ICC e FC Intracelular - P13473

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da LAMP2

• A LAMP2 (glicoproteína de membrana 2 associada aos lisossomos), também conhecida como CD107b, LAMP-2, LGP-96 ou LGP110, é uma proteína transmembranar altamente glicosilada codificada pelo gene LAMP2. Por meio de splicing alternativo, produz três isoformas principais: LAMP-2A, LAMP-2B e LAMP-2C, que diferem em suas caudas citosólicas e apresentam distribuições teciduais distintas.
• Como uma glicoproteína essencial da membrana lisossomal, a LAMP2 desempenha um papel fundamental na biogênese dos lisossomos e na regulação do pH, atuando como inibidor direto do canal de prótons TMEM175, facilitando assim a acidificação lisossomal e a atividade ideal das hidrolases. Referências relacionadas: PMID:37390818
• A LAMP2 é um mediador central da autofagia mediada por chaperonas (CMA), uma via de degradação seletiva. Ela se liga a complexos de chaperonas citosólicas (por exemplo, HSPA8/HSC70), que transportam proteínas-alvo como GAPDH, GPX4, NLRP3 e MLLT11 até a membrana lisossomal, onde a LAMP2 atua como receptor para translocar os substratos para o interior do lisossomo para degradação. Referências relacionadas: PMID:11082038, PMID:18644871, PMID:24880125, PMID:36586411
• A LAMP2 é necessária para a fusão dos autofagossomos com os lisossomos durante a macroautofagia; as células que não possuem LAMP2 não conseguem acumular STX17 nos autofagossomos, o que impede a fusão e prejudica a degradação da carga autofágica. Referências relacionadas: PMID:27628032
• A LAMP2 facilita a apresentação eficiente de antígenos exógenos mediada pelo MHC de classe II, possibilitando a degradação lisossomal e o subsequente carregamento de peptídeos antigênicos nas moléculas de MHC II recém-formadas, embora seja dispensável para a apresentação de antígenos endógenos. Referências relacionadas: PMID:15894275, PMID:20518820
• Subcelularmente, a LAMP2 está localizada principalmente na membrana lisossomal, mas também é encontrada nas membranas endossomal, autofagossomal e plasmática, refletindo seu tráfego dinâmico e suas funções nas vias endolisossomal e autofágica.
• São observados padrões de expressão específicos das isoformas: a LAMP-2A é altamente expressa na placenta, nos pulmões e no fígado, enquanto a LAMP-2B e a LAMP-2C apresentam distribuições distintas em tecidos como baço, timo, cérebro e intestino delgado. Referências relacionadas: PMID:26856698, PMID:7488019
• Notavelmente, a LAMP2 está associada à doença de Danon, um distúrbio de armazenamento de glicogênio, e seu estudo envolve palavras-chave como splicing alternativo, autofagia, ligação dissulfeto, glicoproteína e hélice transmembranar.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde aos aminoácidos 29-375 da LAMP2 humana, abrangendo um grande domínio luminal comum a todas as isoformas; essa ampla cobertura permite a detecção de múltiplas variantes de LAMP2 quando a homologia de sequência possibilita.
• O anticorpo está diretamente conjugado com , permitindo a coloração em uma única etapa para imunofluorescência (IF/ICC) e citometria de fluxo intracelular (FC intra), sem a necessidade de anticorpos secundários.
• Para citometria de fluxo intracelular, são necessárias fixação e permeabilização; utilize protocolos padrão (por exemplo, fixação com PFA a 4%, seguida de permeabilização com saponina ou Triton X-100) e otimize os tempos de incubação e as concentrações de anticorpos para o seu tipo celular específico.
• Valide o desempenho do anticorpo no sistema biológico relevante (humano) e inclua controles positivos e negativos apropriados (por exemplo, células do tipo selvagem versus células com knockdown de LAMP2) para confirmar a especificidade.
• Como a LAMP2 é altamente glicosilada e existe em múltiplas isoformas, o peso molecular aparente no Western blot pode diferir dos 44-45 kDa previstos; o teste por WB não está listado. Portanto, se necessário, considere realizar experimentos-piloto para verificar a capacidade de detecção.

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