Anticorpo Monoclonal de Coelho anti-Humano Nectin-4 para Citometria de Fluxo - Q96NY8

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Nectin-4

• A Nectin-4, também conhecida como PVRL4, LNIR e PRR4, é um receptor da superfamília das imunoglobulinas codificado pelo gene NECTIN4 em humanos (ID do Gene 81607).
• Funciona como uma molécula de adesão celular através de interações trans-homofílicas e -heterofílicas, interagindo especificamente com a NECTIN1, e não serve como receptor para a entrada de alfaherpesvírus.
• A Nectin-4 é um membro da família nectina, que inclui quatro membros (nectina-1 a -4), todos contendo três domínios imunoglobulina extracelulares, um único domínio transmembrana e uma cauda citoplasmática.
• A nível subcelular, a Nectin-4 localiza-se na membrana celular, em junções celulares como as junções aderentes, e uma forma solúvel secretada foi detetada.
• Modificações pós-traducionais incluem glicosilação e a formação de ligações dissulfeto, contribuindo para a sua estabilidade estrutural e função.
• A Nectin-4 é predominantemente expressa na placenta e, embora não seja detetada no epitélio mamário normal, é expressa no carcinoma da mama, indicando um papel na biologia tumoral.
• Importante, a Nectin-4 atua como um receptor celular para o vírus do sarampo, facilitando a entrada viral nas células hospedeiras.
• A proteína tem um peso molecular calculado de aproximadamente 55 kDa, com potenciais isoformas (por exemplo, 24 kDa) devido a splicing alternativo.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunogênio corresponde à região extracelular N-terminal (aminoácidos 32–146), que inclui o primeiro domínio do tipo Ig crítico para interações do recetor; este design visa provavelmente epítopos expostos na superfície, tornando-o adequado para a deteção por citometria de fluxo da Nectin-4 nativa em células vivas.
• Uma vez que o anticorpo é conjugado diretamente ao , não é necessário anticorpo secundário, minimizando a ligação inespecífica e simplificando o protocolo de coloração para citometria de fluxo.
• Para um desempenho ideal, titule a concentração do anticorpo para a sua linhagem celular e experimento específicos; considere testar diluições a partir de 1:20–1:100 para 1×10⁶ células, mas as diluições ideais reais devem ser determinadas experimentalmente.
• Dada a especificidade tecidual reportada (placenta, carcinoma da mama) e a localização subcelular (membrana e secretora), inclua controlos positivos apropriados, como tecido placentário, linhagens celulares de carcinoma da mama (por exemplo, MCF-7, T47D) e controlos negativos (epitélio mamário normal ou modelos de knockout/knockdown) para validar a especificidade da coloração.
• Devido à Nectin-4 poder ser libertada como uma forma solúvel, em certos contextos experimentais (por exemplo, sobrenadante ou soro), o anticorpo pode detetar Nectin-4 solúvel; considere isto ao analisar dados de citometria de fluxo de amostras derivadas de sobrenadantes de cultura celular.
• Para pesquisa do vírus do sarampo, este anticorpo pode ser usado para avaliar a expressão de Nectin-4 em estudos de interação vírus-hospedeiro; no entanto, certifique-se de que o epítopo não está mascarado após a ligação viral ou entrada celular.
• As bandas de peso molecular reportadas (24 kDa e 55 kDa) correspondem a isoformas alternativas; ao realizar validação ortogonal (por exemplo, Western blot), estes tamanhos podem ser observados em condições redutoras.

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