Anticorpo Monoclonal Coelho anti-Humano PCSK9 para Citometria de Fluxo - Q8NBP7

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da PCSK9

• PCSK9 é uma proproteína convertase do tipo subtilisin/kexina 9, também conhecida como NARC-1, que regula a homeostase do colesterol plasmático ao se ligar a membros da família dos receptores LDL e promover sua degradação. Referências relacionadas: PMID:18039658
• Ela atua por meio de um mecanismo não proteolítico para aumentar a degradação do receptor LDL hepático por uma via mediada por clatrina, possivelmente direcionando o receptor LDL aos lisossomos. Referências relacionadas: PMID:17461796, PMID:18197702, PMID:18799458
• PCSK9 também inibe a degradação de APOB pela via autofagossomo/lisossomo e regula a eliminação de BACE1. Referências relacionadas: PMID:18660751
• Ela modula a apoptose neuronal ao alterar os níveis de LRP8/APOER2 e inibe a absorção de Na+ mediada por ENaC ao reduzir a expressão superficial de ENaC.
• Se localiza no citoplasma, é secretada e encontrada em endossomos, lisossomos, superfície celular, retículo endoplasmático e aparelho de Golgi.
• Sintetizada como zimogênio, a PCSK9 sofre clivagem autocatalítica; outras modificações pós-traducionais incluem glicosilação, fosforilação, sulfatação e formação de pontes dissulfeto.
• A expressão tissular foi relatada em neuroepitelioma, carcinoma de cólon, linhagens celulares hepáticas e pancreáticas e células de Schwann.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• Este anticorpo foi desenvolvido para citometria de fluxo intracelular; portanto, as células devem ser fixadas e permeabilizadas antes da coloração. Otimize seu protocolo de fixação/permeabilização para o tipo de célula alvo.
• O imunógeno (aa 31–692 da PCSK9 humana) compreende o pró-domínio e o domínio catalítico, portanto o anticorpo pode detectar tanto as formas de PCSK9 de comprimento completo quanto clivadas; valide a detecção no contexto biológico relevante.
• Como anticorpo diretamente conjugado, não é necessário anticorpo secundário, simplificando o procedimento de coloração e reduzindo o fundo.
• Realize a titulação do anticorpo no seu ensaio para determinar a concentração ideal; uma faixa inicial típica para anticorpos conjugados em citometria de fluxo é de 0,125–1 µg por milhão de células, mas isso deve ser verificado empiricamente.
• Este anticorpo é validado para amostras humanas; a reatividade cruzada com outras espécies não foi testada.
• Inclua controles adequados (controle de isotipo, amostra não estimulada) e considere confirmar a especificidade por silenciamento com siRNA ou bloqueio com PCSK9 recombinante.

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