Anticorpo Monoclonal Coelho Anti-Humano Fosfo-PI3K p85α (Y467)/p85β (Y464)/p55γ (Y199) Conjugado a para Citometria de Fluxo (Intracelular) - P27986 / O00459 / Q92569

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização das Subunidades Regulatórias da PI3K (p85α/p85β/p55γ)

• A subunidade regulatória alfa da fosfatidilinositol 3-quinase (PIK3R1) codifica a subunidade regulatória p85α, que existe em múltiplas isoformas por meio de splicing alternativo, incluindo a isoforma 2 expressa no músculo esquelético e cérebro, e em níveis mais baixos no rim e músculo cardíaco.
• Contém um domínio SH3 e dois domínios SH2 que medeiam a ligação a resíduos de tirosina fosforilados em receptores tirosina quinase ativados e proteínas adaptadoras, ligando as subunidades catalíticas p110 à membrana plasmática.
• Funciona como um adaptador crítico na sinalização PI3K/AKT, necessário para a captação de glicose estimulada por insulina e síntese de glicogênio; também atua a jusante de FGFR, KIT, PDGFRA/B e ITGB2. Referências relacionadas: PMID:17626883, PMID:19805105, PMID:7518429
• Modula a resposta ao estresse do retículo endoplasmático, promovendo a translocação nuclear da isoforma 2 do XBP1, melhorando a tolerância à glicose hepática sob sobrecarga metabólica. Referências relacionadas: PMID:20348923
• As subunidades regulatórias p85β (PIK3R2) e p55γ (PIK3R3) compartilham homologia estrutural com a p85α e contêm sítios de fosforilação análogos, embora sua distribuição tecidual e funções específicas possam variar.
• Palavras-chave do UniProt incluem Fosfoproteína, Domínio SH2, Domínio SH3, Splicing alternativo, Citoplasma e Conjugação Ubl; a proteína está sujeita a acetilação e ubiquitinação.
• A localização subcelular é principalmente citoplasmática, onde interage com receptores ligados à membrana.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um fosfopeptídeo sintético correspondente à Y467 da PI3K p85α humana; a reatividade cruzada com sítios fosforilados homólogos na p85β (Y464) e p55γ (Y199) é intencional com base na conservação da sequência, mas o alinhamento de sequências deve ser verificado para considerações de alvos não específicos.
• Para citometria de fluxo intracelular, otimize os protocolos de permeabilização e fixação para preservar os fosfo-epítopos; use controles fosfo-específicos apropriados e condições de estimulação (por exemplo, privação de soro seguida de tratamento com fator de crescimento) para confirmar a especificidade do sinal.
• Como o anticorpo está diretamente conjugado ao , nenhum anticorpo secundário é necessário, reduzindo o fundo; inclua controles de compensação apropriados ao multiplexar com outros fluoróforos.
• Considere validar em linhagens celulares humanas relevantes conhecidas por expressar subunidades da PI3K e fosforilar esses sítios após ativação de receptores de insulina ou fatores de crescimento.

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