Anticorpo monoclonal de coelho anti-Fosfo-PI3KP85α-Y467+P85β-Y464+P55γ-Y199 Humano mAb - P27986 / O00459 / Q92569

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização das Subunidades Reguladoras da PI3K (p85α/p85β/p55γ)

• PIK3R1 codifica a subunidade reguladora p85α da PI3K, que existe como múltiplos isoformas (p85α, p55α, p50α) através de splicing alternativo. O isoforma p85α é a proteína de comprimento total, enquanto os isoformas mais curtos carecem do domínio SH3 N-terminal e da região de homologia BH. Este anticorpo reconhece formas fosforiladas nos três produtos gênicos PIK3R1 (p85α), PIK3R2 (p85β) e PIK3R3 (p55γ).
• As subunidades reguladoras ligam-se a quinases de proteína-tirosina ativadas (fosforiladas) através dos seus domínios SH2, funcionando como moléculas adaptadoras que recrutam a subunidade catalítica p110 para a membrana plasmática, ativando assim a sinalização da PI3K. Referências relacionadas: PMID:17626883 PMID:19805105 PMID:7518429
• As subunidades reguladoras da PI3K são essenciais para a captação de glicose estimulada por insulina e a síntese de glicogênio em tecidos sensíveis à insulina, como músculo esquelético e fígado. Elas também medeiam a sinalização a jusante dos receptores de fatores de crescimento (FGFR1-4, PDGFR, KIT) e da integrina ITGB2. Referências relacionadas: PMID:17626883 PMID:7518429
• p85α modula a resposta celular ao estresse do retículo endoplasmático (RE), promovendo a translocação nuclear do isoforma 2 de XBP1 de uma maneira dependente de estresse do RE e/ou insulina, particularmente durante sobrecarga metabólica no fígado, melhorando assim a tolerância à glicose. Referências relacionadas: PMID:20348923
• As subunidades p85α/p85β/p55γ são primariamente citoplasmáticas, onde se associam à subunidade catalítica p110. Após ativação, são recrutadas para a membrana plasmática para localizar a holoenzima PI3K perto dos seus substratos lipídicos.
• Modificações pós-traducionais incluem fosforilação em múltiplos resíduos de tirosina (por exemplo, Y467 de p85α, Y464 de p85β, Y199 de p55γ) por quinases de tirosina receptoras e não receptoras, o que é crítico para a regulação da atividade da PI3K e interações proteína-proteína. Modificações adicionais incluem acetilação e ubiquitinação.
• O isoforma 2 de PIK3R1 (p55α) é altamente expresso em músculo esquelético e cérebro, com níveis mais baixos em rim e músculo cardíaco. Ao nível proteico, tanto o isoforma 2 quanto o isoforma 4 (p50α) são detectados em músculo esquelético, sugerindo papéis específicos de tecido na sinalização da insulina e metabolismo.
• Mutações em PIK3R1 estão associadas à síndrome SHORT (baixa estatura, hiperextensibilidade, depressão ocular, anomalia de Rieger e atraso na dentição) e outros distúrbios relacionados ao crescimento, destacando seu papel no desenvolvimento e na sinalização do fator de crescimento semelhante à insulina.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunogênio é um fosfopeptídeo sintético que abrange Y467 do p85α humano. Certifique-se de que o seu sistema experimental preserve a fosforilação — use inibidores de fosfatase durante o preparo da amostra e considere condições de estimulação (por exemplo, insulina, fatores de crescimento) para melhorar a detecção do epítopo fosfo.
• Este anticorpo é validado para citometria de fluxo intracelular (FC). Para uma coloração ideal, fixe e permeabilize as células usando protocolos compatíveis com detecção fosfo-específica (por exemplo, fixação com formaldeído seguida de permeabilização com metanol). Titular o anticorpo para determinar a diluição ideal para o seu tipo celular e condições de tratamento.
• Como o anticorpo reconhece fosfo-Y467 de p85α, fosfo-Y464 de p85β e fosfo-Y199 de p55γ, a faixa de peso molecular observada pode variar. Na transferência de Western (se tentada), bandas podem aparecer entre 42-54 kDa (para isoformas mais curtos) e 81-84 kDa (para p85α/p85β de comprimento total). Execute controles positivos apropriados (por exemplo, células HepG2 ou HeLa estimuladas com insulina) e verifique a especificidade usando tratamento com fosfatase.
• Considere usar este anticorpo em combinação com anticorpos totais de subunidade reguladora da PI3K para avaliar proporções de fosforilação em estudos de sinalização. Para FC quantitativa, certifique-se de que o fluoróforo é compatível com a configuração do seu citômetro e que controles de compensação são incluídos se multiplexado.
• A reatividade cruzada é relatada para humano. Se trabalhar com outras espécies, valide a conservação dos sítios fosfo-alvo usando alinhamento de sequência antes do uso.

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