Anticorpo Monoclonal de Coelho anti-Siglec-8 Humana para FC - Q9NYZ4

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Siglec-8

• A Siglec-8 (lectina semelhante à Ig ligante de ácido siálico 8), também denominada membro 2 da família das sialoadesinas (SAF-2), é membro da família de lectinas das sialoadesinas.
• É uma molécula de adesão putativa que medeia a ligação dependente de ácido siálico às células sanguíneas. Referências relacionadas: PMID:10625619 PMID:10856141
• A Siglec-8 liga-se preferencialmente ao ácido siálico ligado por α-2,3 e, em menor grau, ao ácido siálico ligado por α-2,6; as interações cis na mesma superfície celular podem mascarar o local de ligação. Referências relacionadas: PMID:10625619
• Reconhece o ácido N-acetilneuramínico terminal (ácido siálico) com uma galactose 6-O-sulfatada subjacente, apresentando preferência por epítopos de glicanos Gal-6-sulfatados do sialil-Lewis X. Referências relacionadas: PMID:27357658
• A proteína é uma glicoproteína de membrana do tipo I, de passagem única, contendo domínios semelhantes à imunoglobulina, um peptídeo-sinal e uma hélice transmembrana; apresenta ligações dissulfeto e potenciais locais de glicosilação.
• A expressão é altamente restrita às células sanguíneas, principalmente basófilos, mastócitos e eosinófilos.
• O splicing alternativo gera isoformas com pesos moleculares previstos de 44 kDa, 46 kDa e 54 kDa.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno (domínio extracelular, aa 17–363) sugere que o anticorpo reconhece a região próxima à membrana da Siglec-8 humana; considere verificar a marcação da superfície celular em comparação com a marcação intracelular em seu ensaio.
• Como este é um anticorpo diretamente conjugado, não é necessária uma etapa de marcação secundária; garanta exposição mínima à luz e fixe as células, se necessário, para a citometria de fluxo.
• Titule o anticorpo para determinar a concentração ideal para seu tipo específico de amostra; as diluições iniciais típicas variam de 1:50 a 1:200, mas isso deve ser validado empiricamente.
• Utilize um controle de isotipo apropriado conjugado ao mesmo fluoróforo para avaliar a ligação de fundo.
• A expressão da Siglec-8 é restrita a basófilos, mastócitos e eosinófilos—realize a cotinção com marcadores de linhagem (por exemplo, CD45, CD3, CD19, CD16, CD123, HLA-DR) para confirmar as populações celulares.
• Para a marcação de sangue total, considere a lise de eritrócitos ou a separação por gradiente de densidade para enriquecer os leucócitos, e valide as estratégias de gating com controles positivos e negativos conhecidos.

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