Anticorpo Monoclonal Coelho anti-Humano Siglec-8 para Citometria de Fluxo - Q9NYZ4

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização de Siglec-8

• Siglec-8 é uma lectina do tipo Ig de ligação ao ácido siálico, também conhecida como membro 2 da família das sialoadhesinas (SAF-2). É codificado pelo gene SIGLEC8 e pertence à subfamília de Siglecs relacionada a CD33.
• Funciona como uma molécula de adesão putativa que media a ligação dependente de ácido siálico a células sanguíneas, reconhecendo preferencialmente ácido siálico ligado a α2,3 e também se ligando a ácido siálico ligado a α2,6. Referências relacionadas: PMID:10625619 PMID:10856141
• Reconhece epítopos que requerem um ácido N-acetilneuramínico terminal (ácido siálico) e uma galactose 6-O-sulfatada subjacente, com preferência por glicanos Lewis X sialilados sulfatados em Gal-6. Referências relacionadas: PMID:27357658
• O sítio de reconhecimento do ácido siálico pode ser mascarado por interações cis com ácidos siálicos na mesma superfície celular, modulando sua atividade de ligação.
• É expresso especificamente na superfície de eosinófilos, basófilos e mastócitos, indicando seu papel em respostas alérgicas e inflamatórias.
• Subcelularmente, está localizado na membrana, consistente com sua função como receptor transmembrana.
• Contém um peptídeo sinal N-terminal, domínios extracelulares do tipo Ig (tipo V e tipo C2 semelhantes a Ig), uma hélice transmembrana e uma cauda citoplasmática; classificado como glicoproteína com pontes dissulfeto.
• Existem múltiplas isoformas proteicas devido a splicing alternativo, com pesos moleculares reportados de 44kDa, 46kDa e 54kDa.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno é uma proteína recombinante que abrange os aminoácidos 17–363, que cobre a região extracelular, garantindo provavelmente o reconhecimento de Siglec-8 nativo expresso na superfície.
• Este anticorpo é validado para citometria de fluxo (CF); considere a titulação de 0,1–1 μg por ensaio para determinar a concentração de coloração ideal para sua população de células.
• Para coloração de sangue total humano ou PBMC, inclua uma etapa de bloqueio do receptor Fc e controles de isótipo apropriados para minimizar a ligação não específica.
• Verifique a especificidade comparando a coloração em células primárias positivas para Siglec-8 (eosinófilos, basófilos) versus linfócitos negativos para Siglec-8.
• Devido ao potencial mascaramento cis do epítopo, verifique se o tratamento das células com sialidase não altera a ligação do anticorpo, se necessário para o seu ensaio.
• Use uma porta de células viáveis e, se for fixar, certifique-se de que as condições de fixação/permeabilização não distorcem o epítopo reconhecido pelo anticorpo.

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