Coelho anti-Humano Syk mAb para FC (intra) - P43405

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do Syk

• O Syk (Tirosina cinase do baço, p72-Syk) é uma tirosina cinase não recetora que medeia a transdução de sinal a jusante de vários recetores transmembranares, incluindo o recetor de células B (BCR), regulando a imunidade inata e adaptativa, a adesão celular e a ativação das plaquetas. Referências relacionadas: PMID:12387735, PMID:33782605

• Essencial para o desenvolvimento de células B, o Syk é necessário para a maturação das células B na transição de pró-B para pré-B e, após o envolvimento do BCR, fosforila adaptadores chave como BLNK e BTK, iniciando múltiplas cascatas de sinalização a jusante. Referências relacionadas: PMID:12456653

• Na imunidade inata, o Syk é ativado por recetores como o CLEC7A em resposta a patogénicos fúngicos, levando à produção de ROS, ativação do inflamassoma e transcrição de citocinas mediada por NF-kB.

• O Syk também funciona em contextos não imunes, incluindo a adesão celular mediada por integrinas, a maturação dos osteoclastos, a ativação das plaquetas via colagénio e o desenvolvimento vascular. Referências relacionadas: PMID:12387735

• A nível subcelular, o Syk reside no citoplasma e na membrana celular, onde se monta em complexos de sinalização com recetores ou adaptadores contendo ITAM fosforilados.

• O Syk é amplamente expresso em tecidos hematopoiéticos, notavelmente em linhagens de células B de pró-B a células plasmáticas, e em neutrófilos, apoiando o seu papel nas respostas imunes adaptativas e inatas. Referências relacionadas: PMID:8163536, PMID:15123770

• Como uma cinase com dois domínios SH2, o Syk catalisa a fosforilação da tirosina e é regulado por fosforilação e ubiquitinação; mutações estão associadas a distúrbios imunes e cancros.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Para citometria de fluxo intracelular, certifique-se de uma fixação e permeabilização adequadas para permitir o acesso do anticorpo ao Syk citoplasmático e associado à membrana. Valide o protocolo usando uma linhagem celular conhecida por expressar Syk (por exemplo, linhagens de linfócitos B) e um controlo negativo apropriado.
• Uma vez que o imunogénio corresponde a uma sequência na região central do Syk humano (aa 251-350), este anticorpo pode reconhecer ambas as isoformas (p72-Syk e p70-Syk) se o epítopo for conservado. Confirme a especificidade na sua amostra por Western blot ou espectrometria de massa se for necessária discriminação de isoformas.
• Titule o anticorpo para um índice de coloração ideal no seu sistema experimental. Considere usar um corante de viabilidade para excluir células mortas, o que pode aumentar o fundo em ensaios intracelulares.
• Inclua sempre um controlo de isotipo conjugado ao mesmo fluoróforo para avaliar a ligação não específica.

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