Anticorpo Monoclonal Coelho Anti-Humano TNF-α Conjugado a para Citometria de Fluxo Intracelular - P01375

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do Fator de Necrose Tumoral

• O fator de necrose tumoral alfa (TNF-α), também conhecido como caquectina ou TNFSF2, é uma citocina-chave da superfamília do TNF e existe tanto na forma transmembrana quanto solúvel. A forma solúvel é derivada da clivagem proteolítica do precursor ligado à membrana.
• O TNF-α se liga aos seus receptores TNFRSF1A/TNFR1 e TNFRSF1B/TNFBR, desencadeando vias de sinalização que levam à apoptose, sobrevivência celular, inflamação e modulação imune. É um potente pirogênio, causando febre direta ou indiretamente via indução de IL-1, e está envolvido na indução de caquexia.
• Na artrite reumatoide, o TNF-α prejudica a função das células T reguladoras (Treg) ao regular positivamente a proteína fosfatase 1 (PP1), que desfosforila o FOXP3 na Ser-418, inativando assim o FOXP3 e tornando as células Treg funcionalmente defeituosas. Referências relacionadas: PMID:23396208
• O TNF-α atua como um mediador da morte celular em respostas imunes anticâncer, exemplificado pelo seu papel com neutrófilos estimulados por BCG e mimetizantes de DIABLO/SMAC em células de câncer de bexiga. Referências relacionadas: PMID:16829952, PMID:22517918, PMID:23396208
• Ele promove a angiogênese ao induzir sinergicamente a produção de VEGF com IL1B e IL6. Referências relacionadas: PMID:12794819
• O TNF-α induz resistência à insulina em adipócitos ao inibir a fosforilação de tirosina da IRS1 induzida por insulina e a captação de glicose, em parte via degradação da proteína GKAP42, e promove a osteoclastogênese, contribuindo para a reabsorção óssea.
• Subcelularmente, o TNF-α está localizado na membrana celular, em membranas intracelulares e é secretado. A forma do domínio intracelular (ICD) do TNF pode adicionalmente induzir a produção de IL12 em células dendríticas.
• Modificações pós-traducionais incluem formação de ligações dissulfeto, glicosilação, miristoilação e fosforilação, que são críticas para sua estabilidade e atividade.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno (aminoácidos 77-233) corresponde à forma solúvel madura do TNF-α, carecendo do domínio transmembrana N-terminal. Este desenho pode favorecer a detecção tanto das formas secretadas quanto dos precursores intracelulares.
• O conjugado é otimizado para citometria de fluxo; para coloração intracelular, considere usar um protocolo de fixação/permeabilização validado para citocinas. Inclua controles de isotipo apropriados e confirme a coloração em amostras estimuladas vs. não estimuladas.
• Realize experimentos de titulação para determinar a concentração ideal de anticorpo para a sua configuração experimental específica, pois os índices de coloração podem variar entre tipos celulares e estados de ativação.

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