Anticorpo Monoclonal Coelhos Anti-Humano/Macaco CD14 Conjugado a para Citometria de Fluxo - P08571

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do CD14

• O CD14 é uma glicoproteína rica em leucina específica de células mieloides, também conhecida como antígeno de diferenciação de monócitos CD14 ou antígeno My23.
• O CD14 funciona como um co-receptor chave para lipopolissacarídeo bacteriano (LPS), mediando o reconhecimento e resposta imune inata. Referências relacionadas: PMID:1698311, PMID:23264655
• Em conjunto com a LBP, o CD14 se liga ao LPS monomérico e o entrega ao complexo LY96/TLR4, impulsionando assim a ativação do NF-kappa-B e a secreção de citocinas pró-inflamatórias via vias dependentes de MyD88, TIRAP e TRAF6. Referências relacionadas: PMID:20133493, PMID:22265692, PMID:23264655, PMID:8612135
• Além disso, o CD14 atua como um co-receptor para heterodímeros TLR2:TLR6 e TLR2:TLR1, reconhecendo lipopeptídeos diacilados e triacilados, respectivamente, e desencadeando sinalização dependente de lipid rafts (microdomínios de membrana). Referências relacionadas: PMID:16880211
• O CD14 também se liga à LDL eletronegativa (LDL(-)) e media a liberação de citocinas induzida pela LDL(-), implicando-o na inflamação relacionada à aterosclerose. Referências relacionadas: PMID:23880187
• No nível proteico, o CD14 é fortemente detectado na superfície de monócitos e fracamente em granulócitos; também é expresso pela maioria dos macrófagos teciduais. Referências relacionadas: PMID:1698311
• Subcelularmente, o CD14 está localizado na membrana celular, enriquecido em lipid rafts, e também encontrado no aparelho de Golgi; uma forma secretada também existe.
• A proteína é uma glicoproteína ancorada por GPI com múltiplas repetições ricas em leucina e ligações dissulfeto, características críticas para sua função.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Para coloração em citometria de fluxo, faça a titulação do anticorpo conjugado a usando células mononucleares do sangue periférico humano (PBMCs) ou leucócitos de macaco cinomolgo para determinar a diluição ótima.
• Como o CD14 é uma proteína de membrana ancorada por GPI, use um protocolo de coloração de superfície celular; evite a permeabilização, a menos que a coloração intracelular seja pretendida, pois isso pode perturbar complexos localizados em lipid rafts.
• Considere a co-coloração com marcadores de monócitos/macrófagos (por exemplo, CD16, CD163) e corantes de viabilidade para delimitar com precisão as populações de monócitos.
• Verifique a reatividade cruzada em amostras de cinomolgos se avançar para estudos com primatas não humanos; a reatividade relatada do anticorpo com cinomolgo permite pesquisa translacional.
• Como o CD14 pode ser liberado como uma forma solúvel, evite etapas excessivas de lavagem que possam remover o anticorpo fracamente ligado; use tampão PBS/BSA 0,5% para coloração.
• Para análise de dados, use controles de compensação apropriados ao usar o , e delimite (gate) em FSC/SSC para identificar populações de monócitos/macrófagos.

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