Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-CD4 Humano/Primata para Citometria de Fluxo - P01730

Especificações e Parâmetros Essenciais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do CD4

• O CD4 é uma glicoproteína transmembrana do tipo I de 51 kDa, pertencente à superfamília das imunoglobulinas, expressa na superfície de células T auxiliares, macrófagos, células dendríticas e células NK, sendo uma característica marcante dos linfócitos T auxiliares.
• Como correceptor, o CD4 liga-se às moléculas do MHC de classe II nas células apresentadoras de antígenos, interagindo simultaneamente com o receptor de células T (TCR) para recrutar a cinase Src LCK, que inicia cascatas de sinalização responsáveis pela ativação das células T, produção de citocinas e diferenciação.
• No timo, o CD4 participa da seleção positiva e do comprometimento da linhagem de células T auxiliares CD4+, essenciais para a imunidade adaptativa.
• O CD4 atua como o principal receptor do HIV-1, mediando a entrada viral nas células hospedeiras; posteriormente, é regulado negativamente pela proteína acessória Vpu do HIV-1 para auxiliar na evasão imunológica. Referências relacionadas: PMID:12089508, PMID:16331979, PMID:2214026, PMID:17346169
• O CD4 também atua como receptor celular para a entrada do herpesvírus humano 7 (HHV-7). Referências relacionadas: PMID:7909607
• As modificações pós-traducionais incluem glicosilação ligada a N, formação de pontes dissulfeto em seus domínios extracelulares semelhantes a imunoglobulinas e palmitoilação em um resíduo de cisteína citoplasmático, que modula a localização na membrana e a sinalização.
• A proteína localiza-se predominantemente na membrana plasmática por meio de uma hélice transmembrana de passagem única, com sua região extracelular organizada em quatro domínios semelhantes a imunoglobulinas (D1–D4), essenciais para as interações com ligantes.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno utilizado para gerar este anticorpo é uma proteína CD4 humana recombinante; portanto, o anticorpo reconhece epítopos nativos dependentes da conformação e é adequado para a marcação de superfície em citometria de fluxo.
• Para aplicações em FC, titule o anticorpo utilizando células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) humanas ou de cynomolgus para determinar a concentração ideal. Inclua controles de isotipo apropriados e realize o bloqueio dos receptores Fc, se necessário.
• Pode-se considerar a marcação de sangue total ou de suspensões de células únicas de tecidos linfoides, seguindo protocolos padrão com anticoagulantes e corantes de viabilidade apropriados.
• As etapas de fixação e permeabilização devem ser validadas, pois podem alterar a acessibilidade dos epítopos; para a marcação intracelular, utilize protocolos otimizados para antígenos de membrana.
• Certifique-se de que as configurações de compensação do instrumento estejam corretamente calibradas para o fluoróforo , a fim de evitar sobreposição espectral, especialmente em painéis multicoloridos.

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