Anticorpo Monoclonal Coelho anti-Humano/Macaco CD8a para Citometria de Fluxo - P01732

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da CD8a

• CD8A é a cadeia alfa da glicoproteína CD8 da superfície de linfócitos T, também conhecida como T8/Leu-2, codificada pelo gene CD8A em humanos. O splicing alternativo produz múltiplas isoformas.
• Sua função principal é atuar como coreceptor de glicoproteína de membrana integral para moléculas MHC de classe I. Em linfócitos T, interage simultaneamente com o receptor de célula T (TCR) e o complexo peptídeo:MHC de classe I, recrutando a quinase Src LCK para o complexo TCR-CD3 para iniciar vias de sinalização intracelular que levam à ativação de linfócitos T citotóxicos (CTL), produção de linfocinas e adesão.
• Homodímeros de CD8A em células assassinas naturais (NK) fornecem um mecanismo de sobrevivência, permitindo a conjugação e lise de múltiplas células alvo, e promovem a diferenciação de linfócitos ativados em linfócitos T CD8 de memória.
• CD8A pertence à superfamília das imunoglobulinas e tipicamente forma heterodímeros ligados por pontes dissulfeto com CD8B (cadeia beta de CD8) em linfócitos T derivados do timo; homodímeros também são expressos em subconjuntos de células imunológicas.
• A localização subcelular inclui a membrana celular e uma forma secretada. É uma proteína de membrana tipo I de passagem única, com peptídeo sinal, domínio extracelular semelhante a imunoglobulina, hélice transmembrana e cauda citoplasmática.
• Especificidade tecidual: Expressa em linfócitos T citotóxicos, um subconjunto de células NK, linfócitos T de memória, linfócitos intraepiteliais, monócitos, células dendríticas e em células dendríticas plasmocitóides após estimulação pelo vírus herpes simplex tipo 1.
• Modificações pós-tradução e palavras-chave: Glicosilada, palmitoilada e contém pontes dissulfeto. Anotada como glicoproteína, lipoproteína, com pontes dissulfeto; envolvida na imunidade adaptativa, splicing alternativo; associada a variantes de doenças.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno é uma proteína recombinante que cobre a região extracelular (aa 22-182). Este design provavelmente produz anticorpos que reconhecem epítopos de superfície em células vivas sem permeabilização, tornando-o adequado para coloração direta em citometria de fluxo (FC).
• Para FC, realize a titulação do conjugado para determinar a diluição de trabalho ideal. Inclua controles apropriados de isotipo e bloqueio de receptores Fc. Verifique a especificidade usando linhagens celulares positivas para CD8A conhecidas (ex: Jurkat) ou células mononucleares de sangue periférico.
• A reatividade cruzada com macaco cynomolgo é relatada. Se estiver usando amostras de cynomolgo, valide o anticorpo no seu próprio sistema de ensaio com controles adequados.
• Vários pesos de proteína (21, 25 e 30 kDa) são indicados; esses valores provavelmente refletem formas glicosiladas diferentes ou variantes de isoformas. Se realizar western blot como etapa confirmatória, espere potenciais múltiplas bandas.
• Para painéis de citometria de fluxo multicolorida, confira a sobreposição espectral mínima com outros fluoróforos e inclua controles de compensação. A natureza monoclonal de coelho e a conjugação direta facilitam resultados reprodutíveis.

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