Anticorpo monoclonal de coelho anti-humano/macaco Ki67 para citometria de fluxo (intracelular) - P46013

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Ki67

• Proteína marcadora de proliferação Ki-67, codificada pelo gene MKI67, também conhecida como antígeno KI-67, MIB-1, KIA e PPP1R105.
• Atua como um organizador de cromossomos mitóticos: funciona como um repelente de cromossomos durante a mitose inicial para manter a dispersão individual dos cromossomos, e como um atrativo de cromossomos durante a mitose tardia para promover o agrupamento de cromossomos (PubMed:27362226, PubMed:32879492, PubMed:35513709). Referências relacionadas: PMID:27362226 PMID:32879492 PMID:35513709
• Forma uma estrutura estendida semelhante a uma escova na superfície do cromossomo, fornecendo uma barreira estérica e eletrostática que impede o colapso do cromossomo; durante a anáfase, a desfosforilação desencadeia a separação de fase líquido-líquido dependente de RNA para promover o agrupamento de cromossomos (PubMed:27362226, PubMed:32879492, PubMed:39153474). Referências relacionadas: PMID:27362226 PMID:32879492 PMID:39153474
• Liga-se ao DNA com preferência por DNA superenrolado e rico em AT, e também se liga ao RNA ribossômico prematuro durante a anáfase, facilitando a separação de fase (PubMed:10878551, PubMed:28935370, PubMed:39153474). Referências relacionadas: PMID:10878551 PMID:28935370 PMID:39153474
• Localização subcelular: reside no nucléolo durante a interfase; relocaliza-se para a superfície dos cromossomos mitóticos durante a mitose.
• Sujeita a modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação, acetilação e ubiquitinação, que regulam sua função e dinâmica dependente do ciclo celular.
• Designada como um marcador de proliferação devido ao seu padrão de expressão dependente do ciclo celular.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo sintético correspondente à região C-terminal (aa 2271-2370) do Ki67 humano. Confirme se o epítopo está acessível em seu protocolo de coloração intracelular.
• Este anticorpo é conjugado diretamente ao para citometria de fluxo intracelular em uma única etapa. Otimize as condições de fixação e permeabilização para o seu tipo celular, a fim de preservar o epítopo Ki67 enquanto garante o acesso do anticorpo ao núcleo.
• A reatividade cruzada com macaco cynomolgus (Macaca fascicularis) sugere adequação para estudos com primatas não humanos; valide a reatividade cruzada em seu sistema de modelo específico.
• Ki67 é uma proteína nuclear grande (peso molecular previsto ~359 kDa), portanto, garanta uma permeabilização adequada e considere o uso de um contracorante nuclear para o gating.
• Para análise quantitativa de proliferação, combine com um corante de conteúdo de DNA (por exemplo, iodeto de propídio) em um ensaio de citometria de fluxo bivariado.

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