Coelho anti-Mouse CD45 Anticorpo Monoclonal para IF/ICC e FC - P06800

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do CD45

• O CD45 (PTPRC) é uma fosfatase proteica tirosina do tipo receptor essencial para a ativação de células T através do receptor de antígeno, atuando como um regulador positivo da coativação de células T após a ligação ao DPP4.
• A proteína contém dois domínios de fosfatase: o primeiro possui atividade enzimática intrínseca, enquanto o segundo influencia a especificidade do substrato do primeiro.
• O splicing alternativo gera múltiplas isoformas, incluindo B220, um marcador bem conhecido para células B e certos subconjuntos de células T ativadas.
• O CD45 localiza-se predominantemente na membrana celular, enriquecido em juntas lipídicas (rafts) e na sinapse imunológica, onde modula a sinalização.
• Ao engajar o receptor de células T, o CD45 recruta e desfosforila efetores a jusante, como SKAP1 e FYN, e modula a atividade de LYN.
• A interação com CLEC10A em células dendríticas imaturas no local de contato da célula T reconhece CD45 portador de antígeno Tn, ajudando a ajustar finamente os limiares de ativação de células T e limitar a autoimunidade.
• A proteína é extensivamente glicosilada e fosforilada, e é classificada como uma proteína de membrana do tipo I de passagem única com um peptídeo de sinal, regiões de repetição em tandem e uma hélice transmembrana.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno abrange o domínio extracelular (aminoácidos 26–566) do CD45 de camundongo, cobrindo a região onde ocorre o splicing alternativo específico da isoforma; o anticorpo pode, portanto, reconhecer múltiplas isoformas de CD45.
• Para citometria de fluxo, considere titular o anticorpo em uma população celular relevante (por exemplo, esplenócitos de camundongo) para determinar a relação sinal-ruído ideal. Use controles apropriados (controle de isotipo, fluorescência menos um) para fazer o gate preciso em leucócitos CD45-positivos.
• Na imunofluorescência (IF/ICC), a permeabilização pode não ser necessária para CD45 corado na superfície, mas as condições de fixação e permeabilização devem ser otimizadas para a co-coloração de marcadores intracelulares. Use um conjunto de filtros compatível com vermelho distante (por exemplo, linha de laser a 647 nm) para detecção.
• Embora validado para IF/ICC e FC, o anticorpo pode ser adequado para outras aplicações; no entanto, os usuários finais devem validar o desempenho em seu sistema de ensaio específico com o tipo de amostra relevante.

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