Anticorpo monoclonal de coelho anti-CD45 de camundongo para IF/ICC, FC - P06800

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização de CD45

• CD45, também conhecido como antígeno leucocitário comum (L-CA) e Ly-5, é uma proteína tirosina-fosfatase do tipo receptor expressa na superfície de todas as células hematopoiéticas nucleadas.
• Desempenha um papel fundamental na ativação de células T ao desfosforilar moléculas de sinalização importantes, como SKAP1, FYN e LYN, modulando assim os limiares de sinalização a jusante.
• Por meio de sua interação com DPP4, CD45 atua como um regulador positivo da coativação de células T, intensificando a sinalização do receptor de antígeno.
• Na sinapse imunológica, CD45 interage com CLEC10A nas células dendríticas, reconhecendo CD45 modificado pelo antígeno Tn nas células T efetoras para ajustar a ativação e limitar a autorreatividade.
• A proteína contém dois domínios fosfatase intracelulares em tandem; o primeiro domínio possui atividade catalítica, enquanto o segundo influencia a especificidade pelo substrato.
• O splicing alternativo gera múltiplas isoformas, incluindo B220 (CD45R), que são expressas diferencialmente entre os subconjuntos de leucócitos, permitindo uma regulação funcional diversificada.
• CD45 está localizado na membrana celular, nos microdomínios de membrana e na sinapse imunológica, em consonância com seu papel na iniciação de sinais e na modulação de correceptores.
• Modificações pós-traducionais extensas, incluindo glicosilação ligada a N e fosforilação, regulam sua estabilidade, ligação ao ligante e atividade fosfatase.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• Este anticorpo foi produzido contra uma proteína recombinante que abrange os aminoácidos 26–566 de CD45 de camundongo, incluindo todo o domínio extracelular. Espera-se que reconheça um epítopo extracelular, tornando-o adequado para marcação de células vivas em citometria de fluxo sem permeabilização.
• Para imunofluorescência, pode-se utilizar fixação padrão (por exemplo, PFA a 4%) e permeabilização opcional. Deve ser observada marcação de membrana devido à topologia transmembrana de CD45.
• Como conjugado direto , não é necessário utilizar anticorpo secundário. Os títulos ideais devem ser determinados empiricamente para cada sistema experimental, a fim de obter uma marcação específica com o mínimo de sinal de fundo.
• Devido à alta expressão de CD45 nos leucócitos, este anticorpo é ideal para identificar e delimitar populações de células imunes em citometria de fluxo. Inclua controles de isotipo e de fluorescência menos um (FMO) apropriados.

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