Anticorpo monoclonal de coelho anti-CD8a de camundongo para citometria de fluxo - P01731

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização de CD8a

• CD8a (glicoproteína de superfície de células T, cadeia alfa de CD8), também conhecida como Lyt-2, é uma glicoproteína de membrana integral pertencente à superfamília das imunoglobulinas. Ela desempenha um papel fundamental na imunidade adaptativa ao atuar como correceptor das moléculas de MHC de classe I nas células T.
• Nas células T, CD8a forma um heterodímero com CD8b e interage simultaneamente com o receptor de células T (TCR) e com os complexos MHC de classe I:peptídeo nas células apresentadoras de antígeno, fortalecendo assim a interação e possibilitando a ativação das células T.
• Após o reconhecimento do MHC de classe I, CD8a recruta a quinase da família Src LCK para o complexo TCR-CD3, desencadeando cascatas de fosforilação que levam à produção de linfocinas, motilidade celular, adesão e ativação de linfócitos T citotóxicos (CTLs).
• Nas células natural killer (NK), os homodímeros de CD8a conferem uma vantagem de sobrevivência ao facilitarem a conjugação e a lise sequencial de múltiplas células-alvo, independentemente de sua função como correceptor nas células T.
• A sinalização de CD8a promove a sobrevivência e a diferenciação de linfócitos ativados em células T CD8+ de memória, contribuindo para a memória imunológica de longo prazo.
• CD8a é uma proteína transmembrana localizada na membrana celular, apresentando um peptídeo sinal, um domínio extracelular semelhante à imunoglobulina e uma cauda citoplasmática palmitoilada.
• A proteína passa por várias modificações pós-traducionais, incluindo N-glicosilação, formação de pontes dissulfeto e palmitoilação, que são essenciais para sua estabilidade, dobramento e ancoragem à membrana.
• O splicing alternativo do gene Cd8a produz múltiplas isoformas, potencialmente modulando sua expressão e função em diferentes tipos celulares.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno (aminoácidos 28–196 de CD8a de camundongo) corresponde à região extracelular, tornando este conjugado adequado para detectar CD8a na superfície celular por citometria de fluxo sem a necessidade de permeabilização.
• Para citometria de fluxo, titule o anticorpo para determinar a concentração ideal para seu tipo celular específico e protocolo de coloração. Inclua um controle de isotipo apropriado e um discriminador de células vivas/mortas para garantir uma estratégia de gating precisa.
• Incube com o anticorpo por 20–30 minutos no gelo e no escuro para minimizar a internalização do antígeno e o fotobranqueamento do fluoróforo. Lave bem as células para reduzir a ligação inespecífica.
• CD8a é expresso em células T citotóxicas e em subconjuntos de células NK; portanto, o anticorpo pode ser usado para identificar e fenotipar essas populações em tecidos linfoides e sangue de camundongo.
• Como anticorpo monoclonal de coelho, este reagente normalmente proporciona alta consistência entre lotes e baixo background, mas sempre valide o desempenho em seu próprio sistema de amostras.

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