Coelho anti-Mouse IgM Anticorpo Monoclonal para Citometria de Fluxo - P01872

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Constante Pesada de Ig

• A constante pesada de imunoglobulina mu (região constante da cadeia pesada de IgM) é codificada pelo gene Ighm (Igh-6) e constitui a região constante dos anticorpos IgM.
• A IgM ligada à membrana (mIgM) é um componente central do complexo do receptor de células B (BCR), fornecendo sinalização tônica constitutiva essencial para a sobrevivência das células B e mediando a sinalização do pré-BCR que regula a seleção de células B e a exclusão alélica.
• A IgM secretada (sIgM) multimeriza-se principalmente em pentâmeros (ocasionalmente hexâmeros), conferindo reconhecimento de antígenos de alta avidez. A sIgM natural é polirreativa, reconhecendo estruturas próprias e de patógenos, enquanto a sIgM imune é específica do antígeno; ambas são necessárias para uma resposta imune humoral eficiente. Referências relacionadas: PMID:10899913 PMID:28135254 PMID:34788614
• A sIgM media funções efetoras principalmente através de receptores Fc (por exemplo, FCMR em células linfoides) e do sistema complementar. Ela recruta C1q para iniciar a via clássica do complemento e, juntamente com C1q e a lectina ligante de manose, promove a fagocitose de células apoptóticas por macrófagos, auxiliando na limpeza de epítopos autoimunogênicos. Referências relacionadas: PMID:10899913 PMID:11062505 PMID:28135254
• Na imunidade mucosa, a sIgM é transportada através do epitélio mucoso via o receptor de imunoglobulina polimérica (PIGR) para varrer a mucosa. Os complexos IgM-antígeno podem sofrer retrotranscitose mediada por FCMR através das células M em direção às células apresentadoras de antígeno nos tecidos linfoides mucosos. Referências relacionadas: PMID:34788614
• Localização subcelular: A forma secretada é liberada no espaço extracelular; a forma ligada à membrana reside na membrana celular com um domínio transmembrana de passagem única.
• Especificidade tecidual: Expressa na medula óssea e em células B-1 e B-2 (em nível de proteína).
• Modificações pós-traducionais incluem formação de pontes dissulfeto e glicosilação, críticas para o dobramento adequado e multimerização.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno compreende os aminoácidos 105-454 da região constante da IgM de camundongo; portanto, espera-se que o anticorpo reconheça o domínio constante de todas as subclasses de IgM de camundongo, independentemente da especificidade da região variável.
• Para citometria de fluxo, titule o anticorpo em esplenócitos de camundongo ou linhagens de células B para determinar a concentração ideal de coloração. Considere a coloração simultânea com um marcador pan-B (por exemplo, anti-CD19) para confirmar a especificidade.
• O fluoróforo é um corante vermelho distante (excitação ~650 nm, emissão ~668 nm). Certifique-se de que seu citômetro esteja equipado com um laser vermelho apropriado (por exemplo, 633 nm ou 640 nm).
• Se realizar coloração intracelular, otimize as condições de fixação e permeabilização, pois o epítopo reside dentro da região constante e pode ser preservado após a permeabilização.
• Inclua um controle de isótipo (monoclonal de coelho conjugado ao mesmo fluoróforo) para contabilizar a ligação inespecífica.

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