Anticorpo monoclonal de Rato anti-Mouse CD45R/B220 para Citometria de Fluxo - P06800

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: CD45R/B220 (Fosfatase proteica tirosina de tipo receptor C) Função e Localização

• O CD45R/B220, codificado pelo gene Ptprc, é uma fosfatase proteica tirosina de tipo receptor C (PTPRC), também conhecida como antígeno comum de leucócitos (L-CA), antígeno linfocitário 5 (Ly-5) e T200. Múltiplas isoformas são geradas através de splicing alternativo, produzindo variantes de pesos moleculares diferentes (por exemplo, 130, 140, 144 kDa).
• A PTPRC funciona como um regulador positivo crítico da ativação de células T: o seu primeiro domínio de fosfatase possui atividade enzimática, enquanto o segundo modula a especificidade do substrato. Após o envolvimento do receptor de células T, ela recruta e desfosforila moléculas de sinalização como SKAP1 e FYN (por similaridade).
• Também desfosforila a quinase da família Src LYN, modulando assim a atividade da quinase LYN e influenciando cascatas de sinalização a jusante em linfócitos.
• A nível subcelular, a PTPRC localiza-se na membrana celular, enriquecida em lipid rafts da membrana e concentra-se na sinapse imunológica entre células T e células apresentadoras de antígeno.
• A PTPRC interage com a CLEC10A em células dendríticas imaturas na interface célula T–célula dendrítica; esta interação reconhece o CD45 portador de antígeno Tn em células T efetoras, ajustando o limiar de ativação das células T para limitar a autoreatividade.
• A proteína sofre glicosilação e fosforilação, conforme indicado pelas palavras-chave Glicoproteína e Fosfoproteína. É uma proteína transmembrana do tipo I com um peptídeo sinal, um grande domínio extracelular, uma única hélice transmembrana e dois domínios de fosfatase intracelulares.
• Em camundongos, o CD45R/B220 é expresso predominantemente em linfócitos B e em um subconjunto de células T, tornando-o um marcador clássico para linhagens de células B em estudos imunológicos.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Para citometria de fluxo, titule o anticorpo conjugado com para determinar a concentração ideal para o seu tipo de célula e protocolo de coloração específicos, pois a ligação inespecífica pode ser reduzida através de titulação adequada.
• Inclua controles de isotipo apropriados (IgG de rato conjugado ao mesmo fluoróforo) para definir parâmetros de compensação e gating em painéis multicoloridos.
• Valide o desempenho do anticorpo em populações celulares positivas e negativas conhecidas (por exemplo, esplenócitos de camundongo onde as células B são CD45R/B220+ e os subconjuntos de células T são principalmente negativos).
• Devido ao grande domínio extracelular e múltiplas isoformas, certifique-se de que o imunógeno recombinante corresponda ao epítopo reconhecido por este clone se a reatividade cruzada entre isoformas for crítica.
• Armazene o anticorpo a 2–8°C protegido da luz; evite ciclos repetidos de congelação-descongelação para manter a estabilidade do conjugado.

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