Anticorpo Monoclonal Rato anti-Mouse CD45R/B220 para Citometria de Fluxo - P06800 / P08575

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização de CD45R/B220

• A fosfatase de tirosina proteica do tipo receptor C (PTPRC), comumente conhecida como CD45, L-CA, Ly-5 ou T200, é uma glicoproteína transmembrana. A isoforma B220 é expressa especificamente em células B e corresponde à variante de alto peso molecular de CD45.
• CD45 é essencial para a ativação de células T através do receptor de células T (TCR), atuando como um regulador positivo da coativação de células T após a ligação a DPP4. O primeiro domínio fosfatase possui atividade enzimática, enquanto o segundo domínio influencia a especificidade pelo substrato.
• Após a ativação de células T, CD45 recruta e desfosforila SKAP1 e FYN, também desfosforila LYN, modulando assim suas atividades quinase.
• Na sinapse imunológica, CD45 interage com CLEC10A em células dendríticas imaturas; essa interação reconhece CD45 que carrega o antígeno Tn em células T efetoras e contribui para a modulação dos limiares de ativação de células T, ajudando a prevenir a auto-reatividade.
• CD45 se localiza na membrana celular, nas membranas de lipídios rafts e na sinapse imunológica, o que é consistente com seu papel na transdução de sinal durante o contato célula-célula.
• O splicing alternativo gera múltiplas isoformas de CD45 (por exemplo, CD45R, CD45RO, B220), que são expressas de forma diferenciada entre as subpopulações de leucócitos e influenciam os resultados da sinalização.
• As modificações pós-traducionais incluem extensa glicosilação N- e O-ligada e fosforilação, que regulam a atividade da fosfatase e a expressão superficial.
• O CD45 de camundongo é codificado pelo gene Ptprc (Ly-5). O anticorpo descrito aqui apresenta reatividade cruzada com CD45R/B220 de camundongo.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O anticorpo é conjugado ao , um fluoróforo excitável por laser violeta. Verifique se o seu citômetro de fluxo está equipado com um laser de 405 nm e filtros de emissão apropriados (por exemplo, passa-banda 450/50) para detecção ideal.
• De acordo com o fornecedor, o anticorpo apresenta reatividade cruzada com CD45R/B220 de camundongo. Se estiver trabalhando com amostras humanas ou de outras espécies, realize testes de reatividade cruzada adequados antes do uso.
• CD45R/B220 é expresso predominantemente em células B; inclua controles de coloração positivos (por exemplo, esplenócitos ou linhagens de células B) e negativos (por exemplo, células T) bem caracterizados para confirmar a especificidade nos painéis de citometria de fluxo.
• O imunógeno usado para a geração inclui um peptídeo de CD45R/B220 de camundongo/humano; portanto, o anticorpo poderia teoricamente reconhecer CD45R/B220 humano. Recomenda-se a validação na espécie e no sistema de amostra relevantes.
• Os pesos proteicos de 130–144 kDa representam diferentes isoformas de CD45. Para aplicações além da citometria de fluxo (por exemplo, Western blotting), garanta marcadores de peso molecular adequados e considere que este produto é validado apenas para FC.
• Armazene e manuseie o anticorpo conforme recomendado para conjugados fluorescentes; após o recebimento, o produto é enviado em bolsas de gelo para manter a estabilidade.

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