RELA pAb de coelho - Q04207

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização de RELA/p65

• RELA/p65 é uma subunidade do complexo do fator de transcrição NF-kappa-B, um regulador pleiotrópico presente em quase todos os tipos celulares e que desempenha um papel central na inflamação, imunidade, diferenciação, crescimento celular, tumorigênese e apoptose.
• Os complexos NF-kappa-B são homodímeros ou heterodímeros formados por RELA, RELB, NFKB1/p105, NFKB1/p50, REL e NFKB2/p52; o heterodímero RELA-NFKB1 é a forma mais abundante e atua como ativador transcricional ao se ligar a sítios kappa-B nos promotores dos genes-alvo.
• RELA pode modular a acessibilidade dos promotores aos fatores de transcrição e regular indiretamente a expressão gênica, contribuindo para seu amplo potencial regulatório. Referências relacionadas: PMID:29813070
• Em células não estimuladas, os dímeros de NF-kappa-B ficam sequestrados no citoplasma pelas proteínas inibidoras I-kappa-B; após a ativação, I-kappa-B é fosforilada e degradada, liberando RELA para se translocar ao núcleo.
• RELA sofre várias modificações pós-traducionais, incluindo acetilação e fosforilação, que ajustam sua atividade transcricional, afinidade de ligação ao DNA e interações com cofatores.
• No nível proteico, RELA é expresso no miocárdio, sugerindo funções específicas dos tecidos além de suas funções ubíquas de sinalização.
• A localização subcelular de RELA é regulada dinamicamente, alternando entre o citoplasma e o núcleo dependendo do estado de ativação da via do NF-kappa-B.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno corresponde aos aminoácidos 400–500 da região C-terminal de RELA de camundongo, garantindo o reconhecimento da proteína de comprimento completo entre espécies com alta homologia. Considere realizar um alinhamento de sequências caso amplie o uso para outros organismos.
• Para Western blot, espera-se uma banda de aproximadamente 60 kDa; inclua controles positivos apropriados (por exemplo, células HeLa ou RAW 264.7 estimuladas) e verifique a especificidade usando lisados submetidos a knockdown ou knockout, se disponíveis.
• Na imunofluorescência/ICC, a localização de RELA é normalmente citoplasmática em células em repouso e nuclear após a ativação de NF-kappa-B; otimize as condições de fixação e permeabilização para preservar esse sinal e use estímulos apropriados (por exemplo, TNF-alfa) para validar a translocação nuclear.
• Para aplicações de ELISA, a combinação com um anticorpo de captura validado pode melhorar a sensibilidade do ensaio. Titule o anticorpo para determinar as concentrações de trabalho ideais em sua matriz de amostra específica.

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