mAb de coelho contra SARS-CoV-2 Spike RBD (N501Y) para WB e ELISA - P0DTC2

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do SARS-CoV-2 Spike RBD (N501Y)

• A glicoproteína spike (S) do SARS-CoV-2 é uma proteína de fusão de classe I trimérica que media a ligação viral e a entrada nas células hospedeiras por meio da interação com o receptor da enzima conversora de angiotensina 2 (ACE2). Referências relacionadas: PMID:32142651, PMID:32155444, PMID:33607086
• É sintetizada como uma proteína precursora e clivada nas subunidades S1 e S2; a subunidade S1 contém o domínio de ligação ao receptor (RBD) que se liga ao ACE2, enquanto a subunidade S2 media a fusão da membrana.
• A clivagem da subunidade S2 no sítio S2' pelas proteases do hospedeiro TMPRSS2 (na superfície celular) ou catepsina L (nos endossomas) expõe o peptídeo de fusão e desencadeia mudanças conformacionais irreversíveis necessárias para a entrada viral. Referências relacionadas: PMID:32142651, PMID:32703818, PMID:34159616, PMID:34561887
• A proteína spike pode usar receptores de entrada alternativos, incluindo neuropilina-1 (NRP1) e NRP2, integrinas e receptor 1 de asialoglicoproteína (ASGR1), influenciando potencialmente o tropismo tecidual. Referências relacionadas: PMID:33082294, PMID:33082293, PMID:35150743, PMID:34837059
• Estruturalmente, o domínio stalk da proteína S contém três dobradiças que conferem considerável liberdade orientacional ao domínio cabeça, uma característica importante para o engajamento do receptor. Referências relacionadas: PMID:32817270
• Ela é intensamente glicosilada e contém múltiplas pontes dissulfeto; um sítio de palmitoilación está presente na cauda citoplasmática. A proteína spike está localizada na membrana do vírion, na membrana do compartimento intermediário ER-Golgi do hospedeiro e na membrana da célula hospedeira.
• Palavras-chave também incluem: imunoevasão viral, inibição da resposta imune inata do hospedeiro e atividade de superantígeno, indicando papéis além da entrada celular.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Este anticorpo foi gerado contra um peptídeo sintético que abrange os aminoácidos 450–550 do SARS-CoV-2 Spike RBD (mutante N501Y) e, portanto, provavelmente reconhece um epítopo dentro dessa região; confirme a especificidade contra o tipo selvagem e outras variantes se forem necessários dados de reatividade cruzada.
• Para Western blotting (WB), use condições redutoras e considere a desglicosilação para melhorar a detecção da proteína spike de comprimento total de ~141 kDa; valide com RBD recombinante ou trímero de spike como controle positivo.
• Em aplicações de ELISA, este anticorpo monoclonal pode servir como reagente de captura ou detecção; a concentração de revestimento e as condições de bloqueio adequadas devem ser otimizadas na matriz de amostra relevante.
• Devido ao papel crítico do RBD na ligação à célula hospedeira, este anticorpo pode ser útil para estudos de neutralização ou ensaios de ligação competitiva, mas esses usos requerem validação funcional independente.

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