Anticorpo Monoclonal de Coelho contra a Proteína Spike S1 do SARS-CoV-2 para WB, IF/ICC, ELISA - P0DTC2

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Spike S1 do SARS-CoV-2

• A glicoproteína Spike (S) medeia a entrada viral ao ligar-se ao receptor da enzima conversora de angiotensina 2 (ACE2) do hospedeiro, um passo fundamental para iniciar a infecção. Referências relacionadas: PMID:32142651 PMID:32155444 PMID:33607086
• Receptores alternativos como neuropilina-1 (NRP1)/NRP2, receptor 1 de asialoglicoproteína (ASGR1) e integrinas também podem facilitar a entrada do vírus, o que pode contribuir para o tropismo por células epiteliais olfativas que expressam baixos níveis de ACE2. Referências relacionadas: PMID:33082294 PMID:33082293 PMID:35150743 PMID:34837059
• A proteína S é clivada por proteases do hospedeiro nas subunidades S1 (ligação ao receptor) e S2 (fusão de membrana); a clivagem no local S2' pela TMPRSS2 ou catepsina L é essencial para a ativação da fusão. Referências relacionadas: PMID:32142651 PMID:32703818 PMID:34159616 PMID:34561887
• Após a clivagem, a subunidade S2 sofre um rearranjo conformacional dramático de um estado de pré-fusão para um grampo trimérico de pós-fusão, aproximando as membranas viral e celular para a fusão.
• Subcelularmente, a proteína spike localiza-se na membrana do vírion, na membrana do compartimento intermediário do retículo endoplasmático-Golgi (ERGIC) do hospedeiro e na membrana da célula hospedeira, refletindo seu ciclo de tráfego e brotamento.
• A proteína S possui propriedades semelhantes a superantígenos e envolve-se na imunoevasão viral, inibindo as respostas imunes inatas do hospedeiro e neutralizando fatores de restrição como a tetherina.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Design do imunógeno: O anticorpo foi produzido contra um peptídeo sintético abrangendo os aminoácidos 200–300 dentro da subunidade S1 (YP_009724390.1), uma região que se sobrepõe ao domínio de ligação ao receptor. Este epítopo é conservado em muitos isolados de SARS-CoV-2, sugerindo ampla reatividade.
• Para Western blot (WB), a proteína spike de comprimento total tem um peso molecular previsto de ~141 kDa; no entanto, a detecção de produtos de clivagem da S1 (aproximadamente 80 kDa) pode ocorrer dependendo da preparação da amostra. Valide usando lisados de células infectadas pelo SARS-CoV-2 ou proteína S1 recombinante.
• Em imunofluorescência (IF/ICC), considere protocolos de permeabilização para detectar a proteína spike intracelular em células infectadas. A co-coloração com marcadores de organelas pode auxiliar no estudo da localização subcelular.
• Para aplicações de ELISA, o anticorpo pode ser usado como reagente de captura ou detecção para proteína S1 recombinante ou quantificação de partículas virais. O título e a reatividade cruzada devem ser confirmados contra variantes relevantes do SARS-CoV-2.
• Como acontece com todos os anticorpos de pesquisa, as diluições de trabalho ideais devem ser determinadas empiricamente para cada ensaio e tipo de amostra.

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