Anticorpo Monoclonal de Coelho para Smac/Diablo para WB, IF/ICC, ELISA - Q9NR28

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização de Smac/Diablo

• Diablo (proteína de ligação direta a IAP com pI baixo), também conhecida como Segundo ativador mitocondrial de caspases (SMAC), é uma proteína pró-apoptótica que promove a apoptose ao ativar caspases na via citocromo c/Apaf-1/caspase-9.
• Ela exerce sua função ao se opor à atividade inibitória das proteínas inibidoras de apoptose (IAP), inibindo especificamente a ligação de BIRC6/BRUCE às caspases. Referências relacionadas: PMID:15200957 PMID:36758104 PMID:36758105
• Diablo reduz a estabilidade e a atividade inibitória de apoptose de XIAP/BIRC4 ao promover sua ubiquitinação e degradação proteassomal, além de interromper a interação de XIAP com a caspase-9 processada para ativar a caspase-3.
• A proteína está localizada na mitocôndria e é liberada no citosol após estímulos apoptóticos.
• Ela é expressa de forma ubíqua, com os níveis mais altos no testículo, também é altamente expressa no coração, fígado, rim, baço, próstata e ovário; níveis mais baixos são encontrados no cérebro, pulmão, timo e leucócitos do sangue periférico.
• O splicing alternativo produz múltiplas isoformas, e mutações neste gene estão associadas à surdez não sindrômica (DFNA64).
• As modificações pós-traducionais incluem conjugação de ubiquitina, e a proteína contém um peptídeo de trânsito para direcionamento mitocondrial.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde aos aminoácidos 56–239 da Smac/Diablo humana madura, cobrindo a região funcional após o processamento mitocondrial; é adequado para detectar a proteína madura endógena (~23 kDa, forma processada) e possivelmente o precursor de comprimento completo.
• Para Western blotting (WB), considere usar lisados mitocondriais ou de células inteiras; o peso molecular previsto do precursor de comprimento completo é 27 kDa, enquanto a forma madura após a clivagem do peptídeo de trânsito migra em aproximadamente 23 kDa. Otimize as condições de lise e carregamento de acordo com isso.
• Na imunofluorescência/imunocitoquímica (IF/ICC), a localização mitocondrial pode ser observada em condições de estado estacionário; após a indução da apoptose, a coloração pode deslocar-se para o citosol.
• Para ELISA, o anticorpo pode ser usado para capturar ou detectar Smac/Diablo recombinante ou endógeno; o pareamento com um anticorpo de detecção contra um epítopo não sobreposto é recomendado para uma sensibilidade ideal.
• A reatividade cruzada com camundongo e rato está especificada; ao trabalhar com essas espécies, valide o anticorpo no sistema de tecido ou célula relevante para confirmar a reatividade e especificidade.

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