Anticorpo monoclonal de coelho contra Histona H3-R17 dimetilada simétrica (Q16695/P68431) para WB, DB, IHC-P e ELISA

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Histona H3

A Histona H3 é um componente central do nucleossomo, que envolve e compacta o DNA em cromatina. Essa compactação limita a acessibilidade do DNA à maquinaria celular e desempenha um papel central na regulação da transcrição, reparo do DNA, replicação do DNA e estabilidade cromossômica. A acessibilidade do DNA é regulada dinamicamente por modificações pós-traducionais (MPTs) nas histonas, coletivamente chamadas de "código das histonas", juntamente com a remodelação do nucleossomo. Referências relacionadas: PMID:19608861, PMID:17194708

A H3 se localiza no núcleo e está associada aos cromossomos. Duas isoformas humanas principais são representadas pelas entradas SWISS Q16695 (Histona H3.1t, específica de testículo) e P68431 (Histona H3.1, amplamente expressa). Enquanto a H3.1t é expressa predominantemente nas células testiculares, a H3.1 canônica está presente na maioria dos tecidos, o que destaca a regulação isoforma-específica das funções da cromatina. Referências relacionadas: Especificidade tecidual UniProt Q16695

A metilação da arginina nas histonas, incluindo a dimetilação simétrica, é uma MPT crítica. A enzima PRMT5 catalisa a dimetilação simétrica de resíduos de arginina, como o sítio R9 bem caracterizado, influenciando a regulação transcripcional e a organização da cromatina. A dimetilação simétrica no R17 da histona H3, alvo deste anticorpo, representa uma modificação relacionada dentro do cenário da metilação de histonas. Embora as funções específicas do R17 dimetilado simétrico sejam menos estabelecidas, é provável que ele participe da ativação ou silenciamento genético dependendo do contexto genômico. Referências relacionadas: PMID:16267050, PMID:17194708

Inúmeras outras modificações estão presentes na H3, incluindo acetilação, fosforilação, citrulinação e ADP-ribosilação, cada uma com maquinarias enzimáticas dedicadas e resultados funcionais distintos. Este anticorpo oferece uma ferramenta para investigar o papel preciso do R17 dimetilado simétrico no complexo código das histonas.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• Confirme a especificidade do anticorpo usando ensaios de competição com peptídeos; considere incubar o anticorpo tanto com o peptídeo R17 dimetilado simétrico quanto com a contraparte não modificada para validar a ligação específica da modificação.
• Para Western Blot, enriqueça as frações de proteínas nucleares para aumentar o sinal e verifique a banda esperada de ~15 kDa em lisados celulares relevantes (por exemplo, HeLa, tecido testicular se usar a isoforma H3.1t).
• Em aplicações de IHC-P, otimize a recuperação de antígenos (por exemplo, tampão de citrato pH 6,0 ou EDTA pH 9,0) e inclua controles negativos (isótipo IgG de coelho) para garantir a especificidade da coloração.
• A detecção baseada em ELISA pode ser realizada usando peptídeos modificados e não modificados como antígenos de revestimento; valide a linearidade e a sensibilidade na faixa de concentração apropriada.
• A reatividade cruzada é prevista para uma ampla variedade de espécies; sempre valide no sistema de amostra específico de seu interesse para garantir o reconhecimento esperado da H3-R17 dimetilada simétrica endógena.

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