Anticorpo policlonal de coelho para Simétrica DiMetil-Histona H4-R3 (P62805) para WB, IHC, IF/ICC, ELISA

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Histona H4

• A Histona H4 é uma das histonas centrais que formam o nucleossomo, a unidade fundamental da cromatina. Juntamente com as histonas H2A, H2B e H3, um octâmero de histonas envolve cerca de 147 pares de bases de DNA, compactando-o e regulando o acesso ao material genético.
• Esse empacotamento é essencial para processos dependentes do modelo de DNA, incluindo transcrição, replicação, reparo e manutenção da estabilidade cromossômica. A regulação dinâmica da estrutura da cromatina é governada por modificações pós-traducionais (MPTs) nas histonas, muitas vezes chamada de "código das histonas".
• A Histona H4 localiza-se principalmente no núcleo e está associada aos cromossomos. Ela pode se localizar no núcleo quando ocorrem modificações específicas, por exemplo, a acetilação durante a espermatogênese.
• A H4 sofre uma vasta gama de MPTs, incluindo acetilação, metilação, fosforilação, citrulininação e várias acilações. Essas modificações ocorrem em múltiplos resíduos e regulam eventos downstream distintos.
• A dimetilação simétrica da arginina 3 (H4R3me2s) é catalisada pelas proteínas arginina metiltransferases PRMT5 e PRMT7. Essa modificação está implicada na regulação da transcrição e é uma das muitas marcas que compõem o código das histonas. Referências relacionadas: UniProt P62805.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• Esse anticorpo foi desenvolvido contra um peptídeo sintético que compreende os aminoácidos 1-100 da Histona H4 humana (NP_003529.1), com dimetilação simétrica em Arg3. O design do imunógeno sugere especificidade para a forma modificada, mas a reatividade cruzada com formas não modificadas ou outras formas modificadas deve ser avaliada.
• Para Western blotting (WB), o peso molecular previsto da Histona H4 é de ~11 kDa. Considere usar extratos nucleares ou preparações enriquecidas de histonas como controle positivo. Reduza e desnature as amostras antes da carga no gel.
• Em imunohistoquímica (IHC) e imunofluorescência (IF/ICC), pode ser necessário recuperar antígenos para expor o epítopo, especialmente em tecidos fixados em formalina e embebidos em parafina. Teste múltiplos métodos de recuperação de antígenos.
• Valide a especificidade do anticorpo incluindo controles adequados, como ensaios de competição por peptídeo ou comparação com células tratadas com inibidores de metiltransferases.
• Prevê-se que o anticorpo reaja com uma ampla gama de espécies devido à alta conservação da sequência da Histona H4; no entanto, verifique a reatividade no seu sistema de modelo específico.
• Otimize os fatores de diluição de forma empírica para cada aplicação; as diluições iniciais típicas podem ser adaptadas a partir de protocolos existentes para anticorpos policlonais direcionados a modificações de histonas.

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