Anticorpo Policlonal de Coelho anti-TLR4 para WB, IF/ICC, ELISA - O00206

Especificações e Parâmetros Essenciais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do TLR4

• O receptor Toll-like 4 (TLR4) é um receptor transmembranar de reconhecimento de padrões que reconhece padrões moleculares associados a patógenos e danos (PAMPs e DAMPs) para iniciar respostas imunes inatas. Referências relacionadas: PMID:10835634 PMID:15809303 PMID:16622205
• Na membrana plasmática, o TLR4 coopera com o LY96 (MD-2) para mediar a resposta imune inata ao lipopolissacarídeo bacteriano (LPS). Referências relacionadas: PMID:27022195
• O TLR4 sinaliza por meio de MYD88 e TIRAP, levando à ativação de NF-kappa-B e à secreção de citocinas pró-inflamatórias, enquanto a internalização mediada por CD14 desencadeia uma via independente de MYD88 por meio de TICAM1-TBK1-IRF3 para a produção de interferon do tipo I. Referências relacionadas: PMID:10835634 PMID:21393102 PMID:27022195 PMID:14517278
• Em complexo com o TLR6, o TLR4 promove inflamação em monócitos/macrófagos e desencadeia a internalização e a sinalização induzidas por ligantes para a produção de citocinas específicas. Referências relacionadas: PMID:23880187
• O TLR4 também está envolvido em respostas inflamatórias independentes de LPS desencadeadas por ácidos graxos livres e Ni(2+), e inicia a ativação do inflamassoma NLRP3. Referências relacionadas: PMID:20711192 PMID:32894580
• Subcelularmente, o TLR4 está localizado na membrana celular, em endossomos iniciais e em projeções celulares, como ondulações da membrana.
• O TLR4 é altamente expresso na placenta, no baço e nos leucócitos do sangue periférico, e é detectado em monócitos, macrófagos, células dendríticas e células T; também é expresso em células de câncer pancreático. Referências relacionadas: PMID:9237759 PMID:9435236 PMID:27022195 PMID:36232715
• A proteína contém repetições ricas em leucina, uma ligação dissulfeto e é glicosilada; pertence à família dos receptores Toll-like e desempenha um papel fundamental na imunidade inata e nas respostas inflamatórias.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde aos aminoácidos 27-228 do TLR4 humano, abrangendo o domínio extracelular de repetições ricas em leucina; essa região é fundamental para o reconhecimento de ligantes e a dimerização do receptor.
• Para Western blotting (WB), espera-se uma banda próxima de 96kDa; no entanto, a glicosilação e a possível dimerização podem levar à presença de espécies com peso molecular ligeiramente maior. Valide utilizando controles positivos apropriados (por exemplo, células THP-1 e lisados de esplenócitos).
• Na imunofluorescência/imunocitoquímica (IF/ICC), o TLR4 pode ser detectado na membrana celular, nos endossomos e nas ondulações da membrana. Otimize as condições de fixação e permeabilização para o seu tipo celular; considere a coloração simultânea com marcadores dessas compartimentalizações.
• Para ELISA, o anticorpo pode ser utilizado para capturar ou detectar o TLR4; confirme o desempenho com proteína recombinante ou lisados celulares de origem humana ou de camundongo.
• Como anticorpo policlonal, ele pode reconhecer múltiplos epítopos, o que pode aumentar a sensibilidade de detecção, mas também apresentar maior sinal de fundo; recomenda-se otimizar a titulação e o bloqueio.
• É indicada reatividade cruzada com o TLR4 humano e de camundongo; verifique a reatividade no seu sistema experimental específico caso utilize outras espécies.

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