Anticorpo Monoclonal de Coelho anti-Topoisomerase II alfa/TOP2A para WB, IF/ICC, IF-P, IHC-P, ELISA - P11388

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Topoisomerase II alfa

• A DNA topoisomerase 2-alfa (TOP2A) é uma enzima desentrelaçante chave que altera a topologia do DNA gerando quebras de cadeia dupla transitórias, passando uma cadeia intacta através da quebra e religando-a. Referências relacionadas: PMID:17567603 PMID:18790802 PMID:22013166
• Esta enzima é essencial para resolver emaranhados e superenrolamentos de DNA que surgem durante a replicação, transcrição, segregação cromossómica e outros processos que requerem manipulação topológica do DNA.
• A TOP2A é um membro da família das topoisomerases do tipo II e existe como um homodímero; também é conhecida como isoenzima DNA topoisomerase II alfa.
• A proteína localiza-se no citoplasma, nucleoplasma e nucléolo, consistente com os seus papéis no metabolismo do DNA nuclear e na organização cromossómica mitótica.
• As modificações pós-traducionais incluem acetilação, fosforilação e ubiquitinação, conforme indicado pelas palavras-chave UniProt; estas modificações podem regular a atividade enzimática, estabilidade e localização celular.
• A TOP2A é amplamente expressa em tecidos como amígdalas, baço, gânglio linfático, timo, pele, pâncreas, testículo, cólon, rim, fígado, cérebro e pulmão. Expressão elevada é observada em linfomas de alto grau, tumores pulmonares de células escamosas e seminomas.
• Também pode desempenhar um papel na regulação do ritmo circadiano, influenciando a duração do período de oscilação transcricional de BMAL1 (Por similaridade).

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunogénio é um péptido sintético mapeado para os aminoácidos 1431-1531 dentro da região C-terminal da TOP2A humana, uma região que pode conferir especificidade de isoforma. Considere verificar a especificidade através de controlos de knockdown ou knockout.
• Para Western blot, o peso molecular previsto da TOP2A é aproximadamente 174 kDa. Utilize um gel de acrilamida de baixa percentagem (por exemplo, 6-8%) e tempos de transferência prolongados para uma blotagem eficiente desta proteína de alto peso molecular.
• Na imunofluorescência (IF/ICC) e imuno-histoquímica (IHC-P), são esperados padrões de coloração nuclear e nucleolar. Valide comparando com tecidos positivos conhecidos, como amígdalas, baço ou linfomas de alto grau.
• Para ELISA, garanta que o antigénio de revestimento apresenta a região do epítopo adequadamente; ensaios de competição com péptido podem ajudar a confirmar a especificidade de ligação.
• Como um anticorpo monoclonal de coelho recombinante, oferece alta afinidade e reprodutibilidade; no entanto, as diluições de trabalho ideais devem ser determinadas empiricamente para cada ensaio e tipo de amostra.

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