Anticorpo Policlonal de Coelho TriMethyl-Histona H3-K14 (Q16695 / P68431) para WB, IF, ELISA

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Histona H3

A Histona H3 é um componente central do nucleossomo, a unidade fundamental da cromatina. Junto com a H2A, H2B e H4, ela forma o núcleo histônico octamérico ao redor do qual o DNA é enrolado, compactando o genoma e regulando a acessibilidade do DNA. Esse papel estrutural é central para processos como regulação da transcrição, reparo de DNA, replicação de DNA e estabilidade cromossômica. A função da histona H3 é controlada dinamicamente por uma complexa gama de modificações pós-traducionais (PTMs), incluindo acetilação, metilação, fosforilação e outras, coletivamente referidas como "código de histonas". Essas modificações alteram a estrutura da cromatina e servem como plataformas de ligação para proteínas efetoras.

A Histona H3 localiza-se principalmente no núcleo e é distribuída ao longo dos cromossomos. Existem diferentes variantes de H3: a canônica H3.1 e H3.2, a independente de replicação H3.3 e a específica de testículo H3.1t (codificada por H3-4/HIST3H3). De acordo com a UniProt, a variante H3.1t (Q16695) é expressa especificamente em células testiculares, enquanto a H3.1 principal (P68431) é ubíqua. Ambas as isoformas compartilham um alto grau de identidade de sequência e sofrem PTMs semelhantes.

O resíduo K14 da histona H3 é um local bem conhecido de múltiplas PTMs, incluindo acetilação (H3K14ac) e metilação. A tri-metilação da H3K14 (H3K14me3) é uma modificação recentemente reconhecida que pode desempenhar papéis na regulação da cromatina e na expressão gênica. Este anticorpo foi gerado contra um peptídeo sintético que abrange a cauda N-terminal (aa1-100), a região que se projeta do nucleossomo e é mais pesadamente modificada. Espera-se que ele detecte especificamente a forma tri-metilada da K14.

Referências relacionadas: UniProt Q16695 UniProt P68431

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde à cauda N-terminal (aa 1-100) da histona H3 humana. Esta região é altamente conservada, explicando a ampla reatividade cruzada prevista. No entanto, como este anticorpo é direcionado a uma PTM específica (tri-metil K14), recomenda-se a validação no sistema celular ou tecidual de interesse para confirmar a reatividade e especificidade.
• Para Western blotting, as histonas estão fortemente ligadas ao DNA nuclear; assim, protocolos de extração ácida ou enriquecimento de histonas podem melhorar a detecção. Use controles de carregamento apropriados (por exemplo, H3 total ou H4) para normalizar as diferenças de carregamento.
• Para imunofluorescência/ICC, a fixação com paraformaldeído seguida de permeabilização com Triton X-100 é tipicamente eficaz para alvos nucleares. No entanto, o epítopo pode ser sensível à fixação excessiva; otimize o tempo de fixação e a concentração de detergente.
• Como os anticorpos específicos de PTM podem apresentar alguma reatividade cruzada com outras modificações, considere usar ensaios de competição com peptídeos (por exemplo, pré-incubar o anticorpo com peptídeo tri-metil K14 versus peptídeos não modificados ou mono/di-metilados) para verificar a especificidade sob suas condições experimentais.
• ELISA é listado como uma aplicação; para revestimento, peptídeos de histona ou nucleossomos purificados podem ser usados. Certifique-se de que o revestimento cubra adequadamente o epítopo K14me3.

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