Anticorpo Monoclonal de Camundongo TriMethyl-Histona H3-K27 (P68431) para ChIP, CUT&Tag, WB e IHC

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Histona H3.1

• A histona H3.1 é um componente central do nucleossomo, a unidade básica repetitiva da cromatina. Os nucleossomos enrolam e compactam o DNA, regulando o acesso à informação genética.
• Como uma histona chave, o H3 desempenha papéis centrais na regulação da transcrição, reparo do DNA, replicação do DNA e estabilidade cromossômica. A acessibilidade do DNA é controlada por um conjunto complexo de modificações pós-traducionais (PTMs), coletivamente denominadas 'código de histonas', que também envolve o remodelamento de nucleossomos.
• A cauda N-terminal da histona H3 está sujeita a uma vasta gama de PTMs, incluindo metilação, acetilação, fosforilação, citrulinização e outras. Essas marcas são dinâmicas e orquestram vários processos modelados pela cromatina.
• A trimetilação da lisina 27 (H3K27me3) é uma marca repressiva bem caracterizada associada ao silenciamento gênico e formação de heterocromatina, depositada principalmente pelo complexo repressivo Polycomb 2 (PRC2).
• Subcelularmente, a histona H3.1 é localizada no núcleo e associa-se aos cromossomos.

Referências relacionadas: UniProt P68431

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Este anticorpo foi gerado contra um peptídeo trimetilado sintético que abrange resíduos ao redor da K27. Espera-se que reconheça especificamente a forma trimetilada da histona H3 na lisina 27 e pode não apresentar reação cruzada com estados não modificados ou outras metilações. Considere validar a especificidade com ensaios de competição de peptídeos ou controles positivos/negativos apropriados.
• Para análise por Western blot, a extração de histonas através de protocolos de extração ácida frequentemente melhora o sinal e reduz o ruído de fundo. Use um controle de carga, como a histona H3 total ou a histona H4.
• Para imunoprecipitação de cromatina (ChIP) e CUT&Tag, otimize a concentração do anticorpo e as condições de reticulação. A alta especificidade para H3K27me3 o torna adequado para o mapeamento desta marca repressiva em todo o genoma.
• Em imuno-histoquímica (IHC-P), a recuperação de antígeno (por exemplo, recuperação de epítopo induzida por calor) pode ser necessária para expor o epítopo. Valide o padrão de coloração no tecido e tipo celular relevantes.
• Para imunofluorescência (IF/ICC), as condições de fixação e permeabilização devem ser cuidadosamente escolhidas para preservar a arquitetura da cromatina e a acessibilidade do epítopo.
• Embora este anticorpo seja fornecido para múltiplas aplicações, faça sempre testes piloto de diluições e condições em seu sistema experimental específico para garantir o desempenho ideal.

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