Anticorpo Monoclonal de Coelho TriMetil-Histona H3-K27 (Q16695/P68431) para WB, ChIP e Aplicações CUT&Tag

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Histona H3

A histona H3 é uma proteína histona central que, junto com a H2A, H2B e H4, forma o nucleossomo — a unidade fundamental repetitiva da cromatina. Os nucleossomos envolvem e compactam o DNA, controlando assim a acessibilidade das informações genéticas para as maquinarias celulares responsáveis pela transcrição, replicação e reparo. Este papel central torna as histonas reguladores-chave da estabilidade genômica e da expressão gênica.

A versatilidade funcional das histonas é amplamente mediada por uma diversa gama de modificações pós-traducionais (PTMs), coletivamente referidas como o "código das histonas". Essas modificações — incluindo acetilação, metilação, fosforilação e outras — ocorrem em resíduos específicos e governam a dinâmica da cromatina. Entre elas, a trimetilação da histona H3 na lisina 27 (H3K27me3) é uma marca repressora bem estabelecida associada à formação de heterocromatina facultativo e ao silenciamento gênico de longo prazo.

Este anticorpo monoclonal de coelho foi gerado contra um peptídeo trimetilado sintético que abrange a K27 da histona H3 humana (com base em NP_003520.1). Ele reconhece especificamente a histona H3 apenas quando trimetilada na K27, permitindo a detecção precisa desta marca epigenética em vários ensaios.

Referências relacionadas: PMID:16267050, PMID:17194708

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo trimetilado sintético em torno da K27; portanto, espera-se que este anticorpo tenha alta especificidade para o estado trimetilado. Considere verificar a especificidade por dot blot ou ensaios de competição com peptídeos usando peptídeos não modificados, mono-, di- e trimetilados.
• Para Western blot (WB), são recomendados extratos nucleares ricos em histonas ou histonas extraídas com ácido. A banda prevista é de ~15 kDa. Use controles de carregamento apropriados (por exemplo, H3 total ou anticorpo C-terminal da histona H3) para normalizar o carregamento de proteína.
• Na imunoprecipitação de cromatina (ChIP), este anticorpo pode ser usado para enriquecer regiões de cromatina marcadas por H3K27me3. Otimize o cisalhamento da cromatina e a concentração do anticorpo para cada tipo de célula. Inclua regiões de controle positivas (por exemplo, loci de genes HOX) e negativas (por exemplo, promotores de genes de manutenção) na análise de qPCR.
• Para CUT&Tag (Cleavage Under Targets & Tagmentation), o anticorpo pode servir como anticorpo primário para direcionamento e clivagem in situ. Siga o protocolo do fabricante para abordagens baseadas em contas ou ligação direta. A análise em todo o genoma pode revelar a distribuição de H3K27me3 em todo o genoma.
• Em imunofluorescência (IF/ICC) e imuno-histoquímica (IHC-P), espera-se coloração nuclear. Otimize as condições de fixação (por exemplo, 4% PFA para IF, seções embebidas em parafina e fixadas em formol para IHC) e permeabilização. O bloqueio com soro/BSA pode minimizar o fundo.
• Sempre valide o anticorpo no sistema de amostra relevante e no contexto da aplicação. Titule o anticorpo e inclua controles apropriados para garantir resultados reprodutíveis.

CamelBio: Sua Ponte de Abastecimento Completa

A CamelBio atua como um parceiro de abastecimento completo e único para matérias-primas de IVD, preenchendo a lacuna entre a descoberta de reagentes e a aplicação clínica. Para pesquisa em epigenética e biologia da cromatina, oferecemos anticorpos monoclonais e policlonais validados como este mAb de Coelho TriMetil-Histona H3-K27, juntamente com pares de anticorpos otimizados, reagentes auxiliares a granel e abastecimento personalizado de alvos raros. Se você precisa de reprodutibilidade consistente entre lotes ou assistência para escalar seu ensaio diagnóstico, a CamelBio é dedicada a apoiar todo o seu pipeline de desenvolvimento, do conceito à clínica.